蛋白分析FAQ彙總

• • 『WB實驗』蛋白訊號弱或者無訊號是什麼原因?

  當 WB 實驗中蛋白訊號弱或者無訊號時，可能有以下幾個原因： 1.樣品製備問題： 蛋白質含量不足：樣品中的蛋白質含量可能過低，無法產生足夠的訊號。可以嘗試增加樣品的蛋白質含量，例如透過增加細胞數或組織量來提高蛋白質的濃度。 樣品處理不當：樣品在製備過程中可能受到不適當的處理，例如長時間的

• • 為啥WB跑蛋白的時候，樣品連成一條線了？

  當進行WB實驗時，樣品在膜上連成一條線的現象是由於蛋白質在電泳分離和轉移過程中的堆積效應以及蛋白質的連續性所導致的。這種現象在一些情況下可能會對實驗結果的解讀產生影響，因此在進行WB實驗時，需要注意樣品的載入量和電泳條件的最佳化，以確保蛋白質在凝膠和膜上的分離和轉移效果最佳。 1.蛋白質電

• • 檢測目的蛋白用WB就可以了吧，為什麼要用免疫沉澱呢，不太懂，望大神講解一下？

  Western Blot (WB) 和免疫沉澱 (IP) 是兩種不同的技術，每種技術都有其特定的應用和優點。儘管兩者都涉及到抗體的使用，但它們的目的和所提供的資訊是不同的。 Western Blot (WB)： 主要目的：確定特定蛋白質是否存在於樣品中，以及估計其相對丰度。 提供的資訊

• • WB蛋白提取時進了冰會對實驗有影響嗎？

  如果在蛋白質提取過程中不小心混入了冰盒裏的冰，可能會影響蛋白質樣品的濃度和純度： 1.稀釋效應：冰在融化後會增加液體的體積，從而稀釋了樣品。這可能導致蛋白質的濃度降低。 2.樣品汙染：雖然較為少見，但如果冰是在非無菌條件下製備的，那麼可能會引入微生物或其他汙染物。 對於大多數Western

• • 真核過表達目的蛋白WB檢測不到如何解決？

  當在真核系統中過表達目的蛋白，但在Western Blot (WB) 檢測中檢測不到該蛋白時，可能有許多原因。以下是一些建議和策略，幫助您診斷和解決這一問題： 1.檢測方法問題： 確保WB實驗操作步驟正確，包括蛋白樣品的製備、電泳分離、轉膜和抗體探針的使用等。 檢查蛋白樣品的濃度是否適當

• • WB蛋白加入loading buffer配好後沒有煮變性，直接放到-80冰箱凍起來了會降解嗎？

  當WB蛋白加入loading buffer配好後，如果沒有經過煮變性處理，直接放到-80℃冰箱凍起來，一般情況下不會導致蛋白的降解。 WB蛋白的載入緩衝液（loading buffer）通常包含一定濃度的還原劑（如β-巰基乙醇）和SDS（十二烷基硫酸鈉），這些成分有助於蛋白質的變性和解離。在

• • 表達出的蛋白跑WB比預測的小，這是為什麼呢？

  當蛋白質在Western blot（WB）實驗中跑得比預測的小，可能有以下幾個原因： 1.蛋白質修飾：蛋白質在細胞內可能會經歷多種修飾，如磷酸化、甲基化、乙醯化等。這些修飾可以改變蛋白質的電荷、空間構象和分子量，從而影響其遷移速度。如果蛋白質發生了修飾，可能會導致其在SDS-PAGE凝膠中

• • 兩個蛋白WB時共用了內參，但作圖兩個蛋白分別在兩張圖，這種可以用同一內參嗎？

  當你在Western Blot (WB) 實驗中使用內參蛋白（例如 GAPDH、β-actin 等）來對兩個目的蛋白進行標準化時，理論上，只要你確保了以下幾點，即使兩個蛋白被分別展示在兩張圖中，你也可以使用相同的內參蛋白： 來自同一樣品：確保兩個目的蛋白與內參蛋白都是來自同一份細胞裂解液

• • WB計算出蛋白樣品濃度後操作原理是什麼？

  當使用Western Blot（WB）技術來檢測蛋白質表達水平時，我們需要先確定蛋白樣品的濃度。這是因為在WB實驗中，我們需要載入相同數量的蛋白樣品到凝膠上，以確保結果的可比性和準確性。下面是WB計算蛋白樣品濃度的操作原理： 理論基礎：WB計算蛋白樣品濃度的原理是根據比色法或熒光法測定蛋

• • 在進行WB實驗時，提取蛋白為什麼要加蛋白酶和抑制劑？

  在進行 Western Blot (WB) 實驗時，提取蛋白質的過程中加入蛋白酶和抑制劑有以下原因： 1.蛋白酶的加入： 蛋白酶的存在可能會降解目標蛋白質，因此在提取蛋白質的過程中加入蛋白酶可以防止蛋白質的降解。 蛋白酶可以降解細胞內的蛋白質，包括細胞膜上的受體蛋白、細胞骨架蛋白等。透過