肽段覆蓋率/肽譜圖分析

蛋白樣品鑑定過程一般只會使用Trypsin對蛋白進行酶切，鑑定到的肽段覆蓋率大概在60%。爲了得到靶蛋白的全部序列資訊，百泰派克公司會選用在蛋白鑑定過程中常用的6種蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N）分別對靶蛋白進行酶切和鑑定，在得到更多的碎裂肽段片段的同時，經過肽段之間的拼接完成蛋白序列100%的測定。百泰派克公司應用現有的質譜技術平臺，提供以LC-MS/MS為基礎的的肽譜圖分析，此分析可以用於確認重組蛋白是否得到完整表達，檢測重組蛋白表達過程是否發生斷裂。主要用於蛋白質一級結構的確認，透過使用多種蛋白質酶切反應和液質聯用技術對肽段的測序，結合專有的分析軟體，能對任何非特異性蛋白酶酶解產物的質譜資料進行分析。從而實現對所測定靶蛋白序列100%的覆蓋。

質譜法肽段覆蓋率/肽譜圖全序列測定的流程：

• 首先使用6種蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N）分別對靶蛋白進行酶切和鑑定
• 接著使用nano LC-MS/MS或者UV LC-MS/MS對樣品進行分析
• 將得到的肽段覆蓋率/肽譜圖全序列與您提供的理論序列進行比對
• 得到比對結果

質譜法肽段覆蓋率/肽譜圖全序列測定的優點：

（1）特異性及非特異性蛋白質酶的組合，可實現對任何蛋白質（多肽）的鑑定達到100%的覆蓋率。

（2）每個肽段的確認包括：1）基於樣品的質量；2）基於樣品的MS/MS指紋圖譜，所以比僅使用一級質譜進行測定更準確。

樣品要求：

膠內樣品和溶液樣品均可以用來進行上述測序
樣品純度越高越好，建議超過80%的蛋白質
需要的靶蛋白樣品量：10-20ug
蛋白質膠樣品也可用於肽段覆蓋率測定，但需對樣品進行特殊的前處理。

案例分析：

蛋白樣品100%序列驗證服務
在實際的實驗過程中，按照儘量提高效率和降低花費的原則，我們會首先對客戶提供的理論序列進行分析，分析過程是按照幾種不同的蛋白酶酶切位點進行肽段覆蓋率的預測，假如可以僅僅透過3種蛋白酶酶切就可以100%的覆蓋全序列，實際實驗過程就會先用這3種蛋白酶進行酶切和後續的序列分析實驗，這樣可以有效的降低實驗的成本。以下是之前專案的部分資料，該專案中客戶按照理論序列表達抗體藥物，一級序列需要進行驗證，以證明表達得到的抗體與理論序列一致，部分實驗資料展示如下：

結題報告中，我們會按照下圖所示的方式給出肽段覆蓋率的詳細資料。

中/英文專案報告

在技術報告中，百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括：

1. 實驗步驟（中英文）
2. 相關的質譜引數（中英文）
3. 質譜圖片
4. 原始資料
5. 生物藥物肽段覆蓋率資訊

生物藥物肽段覆蓋率測定一站式服務

您只需下單-寄送樣品
百泰派克一站式服務完成：樣品處理-上機分析-資料分析-專案報告