N端序列分析
Edman降解（埃德曼降解）法，是由菲爾•埃德曼（Pehr Edman）首先創立用於肽鏈或蛋白質中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman降解法檢測的原理非常簡單，在鹼性條件下反應，用異硫氰酸苯酯（Phenylisothiocyanate, PITC）與待檢測的蛋白質（多肽）的N-端氨基生成苯氨基硫甲醯（PTC）的衍生物，然後處理-關環-選擇性切斷肽鏈N-端，得到N-端氨基酸殘基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接著用有機溶劑萃取衍生物，在酸的作用下，不穩定的衍生物轉變為穩定的的乙內苯醯硫脲（PTH）衍生物，餘下肽鏈中的醯胺鍵不受影響。透過用HPLC或電泳法分析生成的乙內醯苯硫脲氨基酸（PTH-氨基酸），可以鑑定出氨基酸類別。重複氨基酸鑑定反應可以達到對N端氨基酸按照從N端到C端的方向依次對氨基酸序列進行分析。對於序列較長的蛋白質（多肽），還可以將樣品先切成小的肽段，先對肽段序列分析，再將肽段資訊進行拼接即可獲得完整蛋白質的序列資訊。
蛋白質N端測序流程
Edman降解法用於N端測序的優點：
1. PITC與所有氨基酸殘基的反應產率和回收率高，因此副產物少，可透過色譜進行準確鑑定；
2. 反應時間快，對於大多數氨基酸殘基來說，30min耦合時間，5min切割反應時間即可；
3. 反應後的肽鏈仍然是完整的，可用Edman降解法重複測定新生的N末端氨基酸。
Edman降解法用於N端測序需要注意的問題：
1. 樣品純度需>90%，鹽離子含量在50 mmol/L之內，不含SDS等變性劑，N端必須是均一的高純樣品；
2. 10 Pmol 樣品可以測定20 aa；
3. 液體樣品不能含有蛋白酶，建議儘早測試，防止時間太長容易降解；
4. 轉膜樣品在轉膜前不宜放置太久以防樣品擴散，轉膜後可密封儲存3-6個月，建議使用Coomassie R-250進行染色，電泳快取液建議使用CAPS buffer；
5. 樣品無訊號峰是，建議蛋白進行N-端封閉；
6. 建議整個反應過程中儘可能使用高純buffer。
案例分析：
百泰派克生物科技採用島津公司推出的PPSQ系列儀器實現對蛋白或者多肽樣品N端氨基酸序列的分析，可以分析N端30個以上的氨基酸。以下是我們對某一蛋白藥物進行分析的實際色譜結果，該專案對樣品中蛋白藥物的前15個氨基酸進行了分析。從下圖（第15個氨基酸的色譜圖）可以看出，色譜峰值仍然非常高，可以得到非常準確的結果。
中/英文專案報告
在技術報告中，百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括：
1. 實驗步驟（中英文）
2. 相關的質譜引數（中英文）
3. 質譜圖片
4. 原始資料
5. 生物藥物N端序列資訊
生物藥物N端序列測定一站式服務
您只需下單-寄送樣品
百泰派克一站式服務完成：樣品處理-上機分析-資料分析-專案報告
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