蛋白質水解

自然界中發現的蛋白質大小從5kDa到400kDa不等。蛋白質水解過程將蛋白質切成較短片段，即肽段，蛋白質水解是肽質譜鑑定分析之前至關重要的一步，是蛋白質鑑定和表徵、生物標記物的發現成功進行的基礎。儘管質譜可以研究完整的蛋白質，但是較小的肽更容易進行蛋白質鑑定。且可提高蛋白質的覆蓋率，因為蛋白質覆蓋率由於溶解性和異質性可能會降低。因此，最常見的蛋白質組學方法往往會利用位點特異性酶切位點來產生較小的多肽片段。質量較小的肽段更容易透過高效液相色譜（HPLC）和HPLC偶聯質譜進行分離和表徵。




百泰派克基於質譜的蛋白鑑定示例

BTP-蛋白質水解服務

百泰派克生物科技提供兩種水解蛋白質的方法：（1）凝膠內水解（聚丙烯醯胺凝膠基質中的蛋白質水解）；（2）溶液內水解（蛋白質在氯仿/甲醇中沉澱，然後在尿素中再溶解後進行）。透過一維或二維凝膠電泳分離的蛋白質，可直接在凝膠內進行水解，凝膠內水解，有效且可重現好，但比較費力費時。相較於凝膠內水解，溶液內水解方法更省力，所需的時間較少，但溶液內水解的蛋白，蛋白的再溶解度低，可能會導致一定的樣品損失。

蛋白質水解的流程

百泰派克生物科技可同時提供凝膠內水解和溶液內水解兩種蛋白質水解相關服務。蛋白質水解的工作流程包括：

1. 製備裂解液；
2. 溶液內或凝膠內進行酶切;
3. 使用離液劑（如尿素和胍）使蛋白質變性；
4. 使用DTT還原二硫鍵；
5. 使用碘乙酸或碘乙醯胺將半胱氨酸烷基化；
6. 去除試劑和交換緩衝液；
7. 在適當的pH和溫度下，用胰蛋白酶或其他蛋白酶在碳酸氫銨緩衝液中過夜變性約18小時；
8. 加入酸類物質終止酶切。
9. 蛋白質富集/清洗。



蛋白質水解的工作流程

樣品要求
百泰派克生物科技可處理各種型別的樣本，包括但不限於：

天然來源的蛋白質；
重組來源的融合蛋白和標記蛋白；
不同亞型的抗體；
膜蛋白及其他。


蛋白質酶切的優點

• 靈活性：我們提供凝膠內和溶液內水解兩種蛋白質水解策略；
• 高準確性和覆蓋範圍：我們的水解服務可以大大提高質譜分析的準確性和覆蓋範圍。
• 應用廣泛：可促進蛋白質的鑑定和表徵，發現疾病的生物標誌物，並有助於理解生物學過程。
• 完整的蛋白質組學服務：我們提供完整的蛋白質組學服務，涵蓋蛋白質組學分析的整個過程，可對水解後的樣品進行分析測定，一站式為您解決組學問題。

百泰派克生物科技還提供高通量自動化蛋白質水解服務，歡迎諮詢。