HILIC-UHPLC分析N-聚糖鍵

糖苷鍵很少對糖蛋白的功能產生影響，因此通常不需要確定。然而，糖蛋白的聚糖結構高度複雜，評估N-糖的糖苷鍵的構型和位置對分析糖蛋白的結構是有幫助的。已知有五種常見的N-聚糖鍵，最常見的是N-乙醯氨基葡糖與天冬醯胺（GlcNAcβ1-Asn）連線。與Asn連線的其他型別包括：哺乳動物和古生菌的層粘連蛋白中的葡萄糖，古生菌中的N-乙醯半乳糖胺（GalNAc），鼠李糖素細菌。也有報告顯示，葡萄糖在甜玉米中與精氨酸連線。




HILIC-UHPLC分析N-聚糖鍵

N-聚糖透過N-糖苷酶F（Peptide N Glycosidase F，PNGase F）反應從糖蛋白中水解出來。水解的N-聚糖用2-氨基苯甲醯胺（2-AB）標記，然後用多種外切糖苷酶消化。最後，透過親水相互作用色譜法（HILIC）結合熒光和質譜檢測對聚糖進行分析。
N-聚糖鍵分析一般步驟
1. 樣品製備
2. N聚糖水解
3. 2-AB標記和標記的聚糖與一系列外切糖苷酶順序反應
4. 基於UPLC-HILIC-FLD的分析
5. 此外，可以透過MS/MS片段確定詳細的聚糖結構

內切糖苷酶的作用：
內切糖苷酶能從糖蛋白或糖脂中水解寡糖。通常它不會從結合的蛋白質和脂質分子中水解寡糖。內切糖苷酶透過破壞聚合物中兩個糖單體之間的糖苷鍵起作用。
內切糖苷酶H：水解低聚甘露糖和雜合N-聚糖
內切糖苷酶F：水解簡單的二價N-聚糖
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