兩個蛋白WB時共用了內參,但作圖兩個蛋白分別在兩張圖,這種可以用同一內參嗎?
當你在Western Blot (WB) 實驗中使用內參蛋白(例如 GAPDH、β-actin 等)來對兩個目的蛋白進行標準化時,理論上,只要你確保了以下幾點,即使兩個蛋白被分別展示在兩張圖中,你也可以使用相同的內參蛋白:
1.來自同一樣品:
確保兩個目的蛋白與內參蛋白都是來自同一份細胞裂解液或組織提取物。
2.相同的樣品處理流程:
確保兩個目的蛋白都經過了相同的樣品處理流程(例如樣品的製備、沸騰時間、電泳條件等)。
3.相同的轉印效率:
轉印步驟中,確保蛋白從凝膠轉移到膜上的效率是恆定的,不會因為不同的蛋白而發生變化。
4.減少人為干擾:
操作過程中要儘量避免人為因素導致的誤差,例如樣品的加入量、電泳時間、轉印時間等。
5.記錄內參的訊號強度:
對於內參的訊號,你需要確保記錄其訊號強度,並用於後續的定量分析和標準化。
6.確保內參蛋白的表達是恆定的:
內參蛋白應該在不同的條件下或在不同的樣品中保持恆定的表達,如果內參蛋白的表達受到某些實驗條件的影響,那麼它可能不適合作為一個好的內參。
只要你確保了上述各點,那麼即使兩個目的蛋白被分別展示在兩張圖中,也是可以使用相同的內參蛋白進行定量分析和標準化的。但爲了提供更有說服力的資料,最好在文章或報告中註明使用了相同的內參,並確保讀者能夠清楚地瞭解到你的實驗設計和數據處理流程。
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