在進行WB實驗時,提取蛋白為什麼要加蛋白酶和抑制劑?
在進行 Western Blot (WB) 實驗時,提取蛋白質的過程中加入蛋白酶和抑制劑有以下原因:
一、蛋白酶的加入:
1.蛋白酶的存在可能會降解目標蛋白質,因此在提取蛋白質的過程中加入蛋白酶可以防止蛋白質的降解。
2.蛋白酶可以降解細胞內的蛋白質,包括細胞膜上的受體蛋白、細胞骨架蛋白等。透過加入蛋白酶,可以將這些細胞內的蛋白質降解掉,從而減少在 WB 實驗中的非特異性背景訊號。
二、抑制劑的加入:
1.在提取蛋白質的過程中,細胞會釋放一些內源性的蛋白酶,這些蛋白酶可能會降解目標蛋白質。因此,加入抑制劑可以有效地抑制這些內源性蛋白酶的活性,保護目標蛋白質的完整性。
2.抑制劑可以阻斷細胞內的訊號傳導通路,從而防止細胞在提取過程中發生異常的訊號轉導,保持蛋白質的原始狀態。
加入蛋白酶和抑制劑在 WB 實驗中起到了保護目標蛋白質完整性和減少非特異性背景訊號的作用。這樣可以提高 WB 實驗的準確性和可靠性。
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