蛋白分析FAQ彙總

• • 為什麼我跑WB的內參還可以，但是目的蛋白總是看不清？

  WB實驗中，如果內參蛋白（通常是穩定表達的蛋白，如 GAPDH 或 β-actin）的訊號是正常的，但是你的目的蛋白（你想要檢測的特定蛋白）的訊號卻看不清。這可能有多種可能的原因，我會嘗試列舉一些可能的原因，並提供一些可能的解決方案。 一、抗體問題： 1.選擇的抗體可能不夠特異：如果你的

• • WB跑過氧化物酶體蛋白，內參可以用過氧化氫酶嘛？

  這個問題的答案取決於你的實驗設計和你想要研究的問題。以下是一些可能的考慮因素： 1. 蛋白表達穩定性：內參蛋白的選擇應該基於其在你的實驗條件下的穩定表達。過氧化氫酶在許多組織和細胞型別中都有表達，但是其表達水平可能會受到氧化應激等因素的影響。如果你的實驗設計涉及到這些因素，那麼過氧化氫酶可

• • WB跑TLR4和NF-kB這兩個蛋白 條帶反亮怎麼辦，已經降低二抗的濃度了。actin 是正常的？

  這種情況可能是由於多種原因造成的： 1. 二抗過量：如果你已經嘗試降低二抗的濃度，然而問題仍然存在，你可能需要進一步降低二抗的濃度，或者嘗試使用不同的二抗。 2. 一抗過量：如果二抗的濃度已經足夠低，那麼可能是一抗的濃度過高。嘗試降低一抗的濃度，看看是否能改善結果。 3. 孵育時間過長

• • 請問有人知道病毒的NP蛋白做WB為什麼曝不出來嗎？

  如果您在嘗試檢測病毒的NP蛋白時沒有得到預期的訊號，可能有以下原因： 1. 抗體選擇：Western Blot實驗的關鍵是選擇正確的抗體。如果你使用的抗體與目標蛋白的親和力不強，或者抗體本身的質量問題，可能會導致你無法檢測到目標蛋白。建議你檢查一下你使用的抗體是否適用於Western Bl

• • wb實驗蛋白電泳時，在濃縮膠裡溴酚藍彌散是是怎麼回事呀？

  溴酚藍是一種常用的追蹤染料，在SDS-PAGE電泳中用於追蹤樣品的遷移。它的遷移速度一般與小分子量的蛋白相似，因此可以用來觀察電泳過程。   彌散現象的原因 1.膠的濃度：如果濃縮膠的濃度設定得不合適，可能會導致溴酚藍的彌散現象。 2.電泳條件：電壓、電流、緩衝液的pH和組成等都可能影響溴

• • western blot，wb出現這種情況為什麼?蛋白跑到了marker上?

  當在Western blot實驗中出現蛋白質跑到marker上的情況時，可能有以下幾個原因： 1.過度載入樣品：如果在Western blot實驗中載入了過多的樣品，蛋白質可能會超出gel的分離範圍，導致一部分蛋白質跑到marker上。這通常發生在樣品中含有過高濃度的蛋白質時，或者在載入樣

• • WB倆個條帶相近，曝光一條條帶後，用一抗二抗去除劑清洗後，曝光另一條目的蛋白，結果為什麼有倆條條帶？

  WB電泳 (Western Blot) 是一種檢測特定蛋白質在樣本中表達量的實驗方法。當你提到兩個條帶相近，並在曝光一個後嘗試清洗以曝光另一個時，仍然觀察到兩個條帶，可能有以下幾種原因： 1.不完全去除：使用的一抗二抗去除劑可能未能完全去除首次的抗體，導致再次曝光時仍然檢測到殘留的訊號。

• • 自制多克隆抗體做wb時，抗原條帶很單一，但提取的蛋白沒有目的條帶且有雜帶，為什麼？

  當自制多克隆抗體在Western blot（WB）實驗中出現抗原條帶很單一，但提取的蛋白沒有目的條帶且有雜帶的情況時，可能存在以下幾個原因： 1.抗體特異性問題：抗體可能不夠特異性，導致其與非目標蛋白結合，形成雜帶。這可能是由於抗體的交叉反應性或非特異性結合引起的。在這種情況下，建議使用更

• • 如果透過植物中的基因找到互作蛋白要進行WB驗證，但是無植物抗體只有動物抗體來做可以嗎？還是有別的方法？

  當我們需要驗證植物中的基因編碼的蛋白與其他蛋白的相互作用時，常用的方法之一是透過免疫印跡（Western blotting，簡稱WB）進行實驗。在WB實驗中，我們通常使用特異性抗體來檢測目標蛋白的存在與否。對於動物蛋白，我們可以使用動物抗體進行WB驗證。然而，如果我們沒有植物特異性抗體，只有

• • 蛋白樣品室溫放一夜會降解嗎?

  蛋白質的穩定性在很大程度上取決於具體的蛋白質本身、樣品的成分、以及儲存條件。但是，對於大多數的蛋白質，在室溫下放置一夜都有可能導致降解。 對於重要的蛋白樣品，建議在分離和純化後立即冷凍並在-80°C下儲存，或者加入適當的穩定劑或抗蛋白酶劑混合物，並在4°C下短時間儲存。如果需要長時間儲存，則