自制多克隆抗體做wb時，抗原條帶很單一，但提取的蛋白沒有目的條帶且有雜帶，為什麼？
當自制多克隆抗體在Western blot（WB）實驗中出現抗原條帶很單一，但提取的蛋白沒有目的條帶且有雜帶的情況時，可能存在以下幾個原因：
1.抗體特異性問題：
抗體可能不夠特異性，導致其與非目標蛋白結合，形成雜帶。這可能是由於抗體的交叉反應性或非特異性結合引起的。在這種情況下，建議使用更特異的抗體，或者最佳化抗體的工作濃度和孵育時間，以減少非特異性結合。
2.蛋白提取問題：
蛋白提取的方法可能存在問題，導致目的蛋白無法被充分提取。蛋白提取的方法應該選擇適合的提取緩衝液，並且應該充分破碎細胞以釋放目的蛋白。此外，蛋白質的濃度也應該適當，過高或過低的濃度都可能導致WB結果不理想。
3.蛋白質降解問題：
蛋白質可能在提取過程中發生降解，導致目的蛋白無法被檢測到。爲了避免蛋白質降解，可以在提取過程中新增蛋白酶抑制劑，並且儘量快速進行實驗以減少蛋白質的降解。
4.蛋白質遷移問題：
蛋白質在電泳過程中可能沒有充分遷移到凝膠上，導致目的蛋白無法被檢測到。這可能是由於電泳條件不正確，例如電壓、時間或凝膠濃度選擇不當。在這種情況下，可以嘗試調整電泳條件，以確保蛋白質能夠充分遷移。
5.蛋白質定量問題：
蛋白質的濃度可能過低，無法被檢測到。在這種情況下，可以嘗試增加載入樣品的量，或者使用更敏感的檢測方法，例如增強型化學發光（ECL）方法。
百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
相關服務：
提交需求
How to order?
