WB倆個條帶相近，曝光一條條帶後，用一抗二抗去除劑清洗後，曝光另一條目的蛋白，結果為什麼有倆條條帶？
WB電泳 (Western Blot) 是一種檢測特定蛋白質在樣本中表達量的實驗方法。當你提到兩個條帶相近，並在曝光一個後嘗試清洗以曝光另一個時，仍然觀察到兩個條帶，可能有以下幾種原因：
1.不完全去除：
使用的一抗二抗去除劑可能未能完全去除首次的抗體，導致再次曝光時仍然檢測到殘留的訊號。
2.多個蛋白的存在：
第二次曝光顯示的另一個條帶可能是由於目標蛋白存在多個亞型或剪下變體導致的。在蛋白質表達過程中，基因可以透過剪下、轉錄後修飾等方式產生多個變體。這些變體可能具有不同的分子量，從而在Western blotting中顯示為不同的條帶。
3.異源蛋白的存在：
第二次曝光顯示的另一個條帶可能是由於存在與目標蛋白相似的異源蛋白導致的。在某些情況下，其他蛋白質可能具有與目標蛋白相似的結構或序列，從而導致它們與一抗發生交叉反應，並在第二次曝光中顯示為另一個條帶。
4.抗體交叉反應：
如果使用的抗體與其他非目標蛋白髮生交叉反應，可能會出現多個條帶。
爲了確定這些條帶的來源，你可以採取以下措施：
1.驗證抗體的特異性：
使用已知表達目標蛋白的細胞系或組織樣本進行Western blotting，並檢查是否只有一個特異的條帶出現。如果出現多個條帶，則可能是抗體的特異性有問題。
2.使用其他抗體：
嘗試使用其他抗體來檢測目標蛋白，以確認是否出現相似的條帶。如果其他抗體也顯示相似的結果，則可能是目標蛋白存在多個亞型或剪下變體。
3.進一步分析：
如果以上方法仍無法確定條帶的來源，可以考慮使用質譜分析等更高階的技術來鑑定條帶中的蛋白質成分，以確定是否存在異源蛋白。
如果你已經嘗試了這些方法但仍然遇到問題，可能需要進一步探索實驗的特定條件和引數。
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