WB跑TLR4和NF-kB這兩個蛋白 條帶反亮怎麼辦,已經降低二抗的濃度了。actin 是正常的?
這種情況可能是由於多種原因造成的:
1. 二抗過量:
如果你已經嘗試降低二抗的濃度,然而問題仍然存在,你可能需要進一步降低二抗的濃度,或者嘗試使用不同的二抗。
2. 一抗過量:
如果二抗的濃度已經足夠低,那麼可能是一抗的濃度過高。嘗試降低一抗的濃度,看看是否能改善結果。
3. 孵育時間過長:
一抗和二抗的孵育時間過長可能會導致非特異性的結合,從而導致條帶反亮。嘗試縮短孵育時間。
4. 洗滌不充分:
在一抗和二抗孵育後,需要充分洗滌以去除未結合的抗體。如果洗滌不充分,可能會導致條帶反亮。增加洗滌次數或洗滌時間可能有助於解決這個問題。
5. 蛋白過量:
如果樣品中的蛋白質過量,也可能導致條帶反亮。嘗試減少樣品的蛋白質量。
6. 阻斷不充分:
如果阻斷步驟不充分,可能會導致非特異性的抗體結合,從而導致條帶反亮。嘗試增加阻斷時間或改變阻斷劑。
7. 曝光時間過長:
如果使用的是化學發光檢測,曝光時間過長可能會導致條帶反亮。嘗試縮短曝光時間。
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