蛋白分析FAQ彙總
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• 最近做Western Blot時,跑膠時有時會有Marker及蛋白丟失的情況,請問這是什麼導致的呢?
當在進行 Western Blot 實驗時,出現 Marker 及蛋白丟失的情況,可能是由以下因素導致的: 1.蛋白負載量過低: 在 Western Blot 實驗中,通常需要載入足夠的蛋白樣品以確保檢測到目標蛋白。如果負載量過低,可能會導致蛋白在電泳過程中無法被完全轉移到膜上,從而導致
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• 做western blot的時候確定蛋白位置可以用麗春紅染色確定嗎?
當進行 Western blot 實驗時,通常是透過使用特異性抗體來檢測目標蛋白的位置。麗春紅染色是一種常用的組織染色方法,但在確定蛋白位置方面並不適用。麗春紅染色是一種組織染色方法,主要用於觀察組織結構和細胞形態,而不是用於確定蛋白質的位置。 百泰派克生物科技--生物製品表徵,多組學生物質
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• 做結構蛋白全長過程中構建質粒時發現其保守區域的氨基酸序列有M,可以把M突變掉嗎?突變掉會不會影響原蛋白的結構和功能?
當考慮改變蛋白質的氨基酸序列時,一般需要考慮以下幾個因素: 1.功能和結構的影響: 每個氨基酸在蛋白質中都有其特定的作用和位置。突變掉某個氨基酸可能會影響蛋白的三維結構和功能。例如,如果M位於一個結構的關鍵位置,或者參與某些功能性的互作,那麼突變它可能會導致蛋白的功能喪失或結構不穩定。
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• 想諮詢一下在計算圓二色譜縱座標Δε (M-1,cm-1) 單位是什麼,以及M的含義
在化學和物理學中,圓二色譜(Circular Dichroism, CD)是一種測量分子對左旋和右旋圓偏振光吸收差異的技術。通常,CD譜的縱座標是Δε,其單位通常是M^−1^cm−1。 在這個單位中: M^−1 指的是摩爾逆,即摩爾濃度的倒數。這是因為CD譜通常是在一定濃度的溶液中測量的
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• 蛋白的質譜定性可以用什麼軟體呢?如果鑑定出來的蛋白量太少可能會和什麼有關呢
在蛋白質質譜分析中,有多種軟體工具可用於蛋白質的定性分析,以下是一些常用的軟體: 1.Mascot: 是一款廣泛使用的商業軟體,由Matrix Science開發。它可以匹配來自多種質譜技術的資料,並與多個蛋白質資料庫進行比較。 2.SEQUEST: 最早由John Yates III開
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O糖修飾,也稱為O-糖基化,是一種在蛋白質的酮基氨基酸上發生的糖類修飾。與N-糖基化不同,O-糖基化的糖類結構和連結方式更為多樣。分析O-糖基化修飾的實驗步驟通常較為複雜。以下是一個基本的實驗流程,具體的步驟和方法可能會根據實驗需求和條件進行調整: 蛋白質提取: 使用適當的提取緩衝液從
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在研究蛋白質的SUMO化(Small Ubiquitin-like Modifier,小泛素樣修飾)修飾時,不一定總是需要切除SUMO分子: 1.如果目的是檢測蛋白質是否被SUMO修飾: 使用Western Blot實驗來檢測蛋白質的SUMO化狀態時,不需要切除SUMO分子,因為SUMO
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• 我們要做western blot 實驗,主要做白色脂肪,怎樣進行蛋白定量呢?
首先,你需要將白色脂肪組織進行適當的處理和裂解以提取蛋白質。一種常見的選擇是RIPA緩衝液,它可以有效地破壞細胞膜並釋放細胞內的蛋白。同時,不要忘記新增蛋白酶和磷酸酶抑制劑,以防蛋白被降解。 提取蛋白後,接下來就是蛋白質的定量。BCA蛋白定量試劑盒是一個不錯的選擇。你只需取適量的蛋白樣品和
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• 檢測蛋白表達量多少用電泳不就可以了嗎,為什麼還要做免疫印跡?
這個問題,涉及到生物學實驗中的兩種常見技術:凝膠電泳和免疫印跡(Western Blot)。雖然這兩種技術都可以用來檢測蛋白質,但它們的應用和優勢是不同的。 一、蛋白質電泳: 1.目的: 主要用於分析蛋白質的大小或質量,並能夠分離不同大小的蛋白質。 2.結果: 可以直觀地看到樣品中蛋白
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雙向凝膠電泳(2D-PAGE)是一種高效的蛋白質分離技術,它能夠在一次實驗中分離上千種蛋白質。其能力主要歸因於它依次使用了兩種不同的分離機制: 1.第一維度:等電聚焦(IEF) 原理:蛋白質根據其等電點(pI,蛋白質不帶電荷的pH值)被分離。在一定的pH梯度下,蛋白質會遷移到它們的等電點
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