蛋白分析FAQ彙總

• • 外膜蛋白ompa。十二肽庫，怎麼用pull down 驗證互作啊?

  透過pull down技術驗證外膜蛋白OMPA與十二肽庫中其他蛋白之間的互作，需要先使用OMPA抗體磁珠複合物將OMPA蛋白從細胞裂解液中捕獲，然後透過洗滌和Elution步驟分離和收集特異性結合的蛋白質。最後，使用蛋白質分離和檢測技術進行分析，以確定OMPA與十二肽庫中的哪些蛋白質發生了互

• • Pull down實驗，HIS標籤蛋白與his柱結合弱怎麼改善？有沒有封閉緩衝液使蛋白與his柱封閉？

  當HIS標籤蛋白與HIS柱結合弱時，可以採取以下方法來改善結合效果： 1.最佳化結合條件： 調整結合緩衝液的pH值、離子強度和溫度等引數，以最佳化蛋白與柱子之間的相互作用。可以嘗試不同的緩衝液體系，如Tris-HCl、HEPES或PBS等，以找到最適合的結合條件。 2.增加結合時間： 延

• • 330kd的超大分子量蛋白怎麼做western blot？

  對於超大分子量（如330kDa）的蛋白進行Western Blot分析時，可能需要調整一些實驗條件以最佳化分離和轉移效果： 1、樣品處理： 由於超大分子量蛋白在凝膠中遷移速度較慢，建議在樣品處理過程中使用較高的還原劑濃度（如DTT或β-巰基乙醇）來完全還原蛋白。 使用較高的蛋白負載量，以

• • western blot蛋白跑了好久都沒有動怎麼辦?

  當 Western blot 蛋白質分析出現沒有結果或者沒有明顯的帶的情況時，可能是實驗過程中出現了一些問題： 1、電源問題： 確保電源已正確連線並且正在工作。 檢查電源設定，確保電壓和電流設定正確 2、電極方向問題： 確保電極的方向正確。錯誤的電極方向會導致蛋白質無法正確遷移。

• • 當細胞內某個蛋白或酶與小分子抑制劑結合了，透過western blot是否檢測到？抗體還能否與之結合？

  Western blot透過特異性抗體與目標蛋白結合來檢測蛋白的存在與表達水平，當細胞內某個蛋白或酶與小分子抑制劑結合後，透過Western blot是可以檢測到的。特異性抗體仍然可以與蛋白質的其他區域結合，形成抗原-抗體複合物，並透過化學發光或染色方法進行檢測。這些方法可以產生視覺化的訊號

• • 檢驗蛋白質的辦法有很多，什麼時候用Westen blot，什麼時候用ELISE呢?是有什麼規則嘛？

  Western Blot和ELISA是兩種常用的蛋白質檢測方法，它們各自有自己的優點和適用場景。 1、Western blot（蛋白質印跡）： 適用情況：Western blot通常用於檢測目標蛋白質的存在、相對錶達水平以及特定修飾狀態，如磷酸化、甲基化等。它可以提供關於目標蛋白質的分子

• • 為什麼western blot 大分子蛋白條帶呈波浪狀？

  Western Blot實驗中，大分子蛋白條帶呈波浪狀（或稱為“微笑效應”）是一個常見的問題，這可能是由以下幾個因素引起的： 1. 電泳條件： 電壓設定：如果執行電泳的電壓過高，可能會導致蛋白質遷移過快，從而產生波浪狀的條帶。 電泳時間：電泳時間過長或過短都可能影響蛋白質的遷移

• • 請問為什麼western blot 蛋白質卡在上面跑不下來？

  當進行Western blot 時蛋白質卡在上面跑不下來，可能有以下幾個原因： 1. 電泳條件不合適： 電壓過低：如果使用的電壓太低，蛋白質的遷移速度會很慢，可能看起來像是蛋白質卡住了。 電泳時間不足：如果電泳時間太短，蛋白質可能還沒有足夠的時間透過凝膠。 2. 凝膠問題：

• • western bolt 配分離膠時分離膠的濃度和目的蛋白的分子量有關還是和一抗蛋白的分子量有關?

  在SDS-PAGE中，分離膠的濃度是根據目的蛋白的分子量來選擇的。分離膠的濃度決定了蛋白質在電泳過程中的遷移速度。較低濃度的分離膠適用於較大分子量的蛋白質，而較高濃度的分離膠適用於較小分子量的蛋白質。 一抗蛋白的分子量與分離膠的濃度無直接關係。一抗蛋白的分子量是指用於檢測目的蛋白的抗體的分子

• • western blot實驗中提取總蛋白時組織勻漿冰上靜置一段時間的作用？

  在Western Blot實驗中，將組織勻漿在冰上靜置一段時間主要是爲了防止樣品中的蛋白質因溫度過高而變性。冰上靜置可以幫助保持低溫，有助於維持蛋白質的天然結構，防止酶的過度活性，從而確保實驗結果的準確性和重複性。 百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商 相關服務