最近做Western Blot時,跑膠時有時會有Marker及蛋白丟失的情況,請問這是什麼導致的呢?
當在進行 Western Blot 實驗時,出現 Marker 及蛋白丟失的情況,可能是由以下因素導致的:
1.蛋白負載量過低:
在 Western Blot 實驗中,通常需要載入足夠的蛋白樣品以確保檢測到目標蛋白。如果負載量過低,可能會導致蛋白在電泳過程中無法被完全轉移到膜上,從而導致 Marker 及蛋白丟失。
2.過度電泳時間:
在電泳過程中,蛋白負載在凝膠上,並透過電場遷移至膜上。如果電泳時間過長,蛋白可能會過度遷移,超出膜的檢測範圍,從而導致 Marker 及蛋白丟失。
3.凝膠不均勻:
凝膠的均勻性對於蛋白遷移的效果至關重要。如果凝膠中存在不均勻的區域,蛋白可能會在遷移過程中受到阻礙或偏移,從而導致 Marker 及蛋白丟失。
針對以上可能的原因,可以採取以下措施來解決 Marker 及蛋白丟失的問題:
1.調整蛋白負載量:
確保在樣品中載入足夠的蛋白負載量,以確保蛋白能夠被完全轉移到膜上。
2.控制電泳時間:
根據實驗條件和目標蛋白的大小,合理控制電泳時間,避免過度遷移。
3.確保凝膠均勻性:
在製備凝膠時,確保凝膠均勻,避免出現不均勻的區域。
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