蛋白分析FAQ彙總

• • 轉膜以後沒封閉，pvdf膜存4℃冰箱前沒晾乾有啥後果？

  將PVDF膜（聚偏氟乙烯）轉膜後直接放入4℃的冰箱而不進行晾乾，可能會帶來幾個潛在的問題： 1.水分殘留： 如果膜上有水分殘留，低溫條件可能導致水分凝結，這可能會影響膜的物理結構和效能。 2.膜結構改變： PVDF膜在潮溼條件下可能發生結構上的改變，這可能會影響其後續的應

• • 做WB時，小kd的條帶跑出來是倒u型彎曲，稍大些kd的是正常的，為什麼呢，是膠沒配好，還是電泳夾子是漏的？

  在蛋白質凝膠電泳（Western Blot, WB）中，如果小分子量（小kd）的蛋白條帶出現倒U型彎曲，而較大分子量（大kd）的蛋白則正常，這可能是由幾個因素引起的： 1.凝膠問題： 如果凝膠製備不均勻或者在聚合過程中發生了問題，可能會導致蛋白質在電泳過程中不均勻遷移。比如，凝膠中的交聯密

• • 如何確定參與蛋白質相互作用的氨基酸序列

  確定參與蛋白質相互作用的氨基酸序列是一個複雜的過程，通常涉及以下步驟： 1.蛋白質相互作用鑑定： 使用技術如酵母雙雜交、共免疫沉澱（Co-IP）、質譜分析等來初步鑑定相互作用的蛋白質。 這可以提供有關哪些蛋白質可能相互作用的資訊，但並不直接提供相互作用的精確氨基酸序列。一旦確定了可能相互

• • 請教蛋白質譜鑑定資料分析問題

  蛋白質質譜分析可以提供多種型別的資料，主要包括： 1.肽段質量/荷比（m/z）資料： 這是質譜分析中最基本的資料，表示了肽段的質量與電荷比。透過這些資料，可以推斷肽段的分子質量。 2.肽段片段離子資料： 在串聯質譜（MS/MS）分析中，肽段被進一步分解成更小的片段，產生獨特的片段譜圖。這

• • 哪些氨基酸可能是泛素化修飾位點

  泛素化是一種蛋白質翻譯後修飾過程，涉及將泛素（一種小的調節性蛋白）連線到底物蛋白上。泛素化主要作用於幾種氨基酸殘基： 1.賴氨酸（Lysine, K）： 賴氨酸的ε-氨基是泛素化最常見的靶點。泛素透過其C末端的甘氨酸與底物蛋白的賴氨酸殘基形成共價鍵。 2.半胱氨酸（Cys

• • 蛋白質的糖基化在哪裏進行? 粗麪型內質網還是光面型內質網?

  蛋白質的糖基化主要在粗麪內質網（Rough Endoplasmic Reticulum, RER）進行。粗麪內質網的表面附著著大量核糖體，這是蛋白質合成的地點。當蛋白質在覈糖體上合成時，它們進入粗麪內質網的腔內，並在那裏進行糖基化，這是一種修飾過程，涉及將糖鏈附加到蛋白質上。 相比之下，光

• • 怎麼確定乳醯化位點

  乳醯化（Lactylation）是一種最近才被發現的蛋白質翻譯後修飾，其中乳酸透過一個共價鍵附加到蛋白質的賴氨酸殘基上。這種修飾在細胞代謝、特別是在乳酸代謝和免疫反應中扮演重要角色。乳醯化位點指的是蛋白質上發生乳醯化的特定賴氨酸殘基。 質譜分析是鑑定蛋白質乳醯化位點的黃金標準。透過分離和鑑

• • 氨基酸質譜檢測用正離子模式還是負離子

  氨基酸的質譜檢測通常使用正離子模式。這是因為氨基酸在溶液中容易形成陽離子，特別是在酸性條件下。在質譜分析中，正離子模式能更有效地檢測和分析這些陽離子形式的氨基酸。 然而，有些特定情況下可能會使用負離子模式，尤其是當氨基酸或其衍生物在分析條件下更傾向於形成陰離子時。這種情況較為少見，取決於具

• • 請問O糖基化WB抗體檢測的protocol？

  O-糖基化Western Blot（WB）抗體檢測的基本步驟如下： 1.樣本準備： 收集並製備含有目標蛋白的細胞或組織樣本。使用適當的裂解緩衝液裂解樣本，然後透過離心去除不可溶物。 2.蛋白濃度測定： 使用BCA蛋白測定試劑盒或類似方法，測定樣本中的蛋白濃度。 3.SDS-PAGE電泳

• • 在製備免疫複合物時，蛋白總量推薦用多少呢？加入的抗體量，蛋白+抗體去孵育，還是需要加點溫和裂解液去孵育呢？

  在製備免疫複合物時，蛋白總量通常建議在幾百微克到幾毫克之間，具體取決於目標蛋白的丰度和抗體的親和力。加入的抗體量一般為1-10微克，具體根據抗體的效率和特異性來調整。將蛋白和抗體混合後，通常需要在溫和裂解液中孵育，以保持蛋白質的天然構象和相互作用。孵育時間和條件（如溫度）也需要根據具體的實驗