蛋白分析FAQ彙總
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• 磷酸化蛋白質組在過柱富集分析等步驟後，怎麼確定蛋白的磷酸化位點的？
質譜技術是確定蛋白磷酸化位點的重要工具，在磷酸化蛋白質過柱富集分析後，接下來的實驗流程如下： 1、蛋白質消化 將富集的磷酸化蛋白質用特定的蛋白酶（如胰蛋白酶）消化成較小的肽段。 2、磷酸化肽段富集 使用特定的親和層析技術（如IMAC或TiO2）來富集磷酸化的肽段。這些富集方法能夠特異性地
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• 為什麼用Alix蛋白抗體，實驗WB上樣細胞裂解液會顯示兩個條帶？哪個爲準？
使用Alix蛋白抗體在Western Blot（WB）實驗中出現兩個條帶可能有以下原因： 1、蛋白質同源異構體： Alix蛋白可能存在不同的同源異構體，這些異構體在分子量上略有不同，從而在凝膠上表現為不同的條帶。 2、蛋白質降解產物： 如果Alix蛋白在細胞裂解過程中部分降解，這可能導致
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在Western Blot (WB) 實驗中，蛋白質加熱變性後出現沉澱是一個常見問題。通常由以下幾個因素引起： 1.蛋白質濃度過高： 如果樣品中的蛋白質濃度過高，加熱時可能會導致蛋白質過度聚集和沉澱。 2.樣品緩衝液不適當： 使用的樣品緩衝液可能不適合所分析的蛋白質。例如，緩衝液的pH值
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Wnt3a是一種疏水性強的蛋白質，其正確的轉膜和電泳條件對於成功的Western Blot實驗至關重要。 1、電泳條件： Wnt3a蛋白的分子量約為39 kDa，因此建議使用10%或12%的聚丙烯醯胺凝膠。 建議在恆壓模式下進行電泳，開始電壓可設定為80-100伏特，直至樣品進入分離凝膠
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• 用一定濃度的乙醇迴流提取樣品時，過濾濃縮好是進行凍幹再上液相測量好，還是旋轉濃縮好直接上液相測量好？
在使用一定濃度的乙醇進行樣品提取後，接下來如何處理樣品以進行液相色譜（HPLC）測量，通常取決於樣品的性質和實驗的具體要求。這裏有兩種常見的方法：凍乾和旋轉蒸發（旋轉濃縮），每種都有其優勢和侷限性。 一、凍幹： 1.優勢： 凍幹可以非常有效地去除所有溶劑，特別適用於熱敏感物質。這種方法不
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• 為什麼有些蛋白在腫瘤組織中高表達卻在血液中低表達或檢測不到？
蛋白質在腫瘤組織中高表達而在血液中低表達或檢測不到的現象可能由多種因素引起： 1.組織特異性表達： 有些蛋白質可能在特定組織中高表達，如腫瘤組織，但在血液中的表達水平較低。這是由於蛋白質的生物學功能和表達調控機制決定的。 2.血液稀釋效應： 即使腫瘤細胞產生大量的特定蛋白質，這些蛋白質釋
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在進行SDS-PAGE時，通常會在凝膠的一側跑一個分子量標準（Molecular Weight Marker），這是一系列已知分子量的蛋白質。這些標準蛋白質在電泳後會形成一系列條帶，每個條帶對應一個特定的分子量。 將樣品和分子量標準一起進行SDS-PAGE電泳，電泳結束後，觀察樣品在凝膠上
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免疫共沉澱（Co-IP）實驗後通常不適合直接用於定量比較，因為此技術主要用於檢測蛋白質間的相互作用，而不是蛋白質的表達量。Co-IP更多地被視為一種定性方法，用於確認蛋白質之間是否存在相互作用。 如果需要進行定量比較，可以考慮使用免疫印跡（Western Blot）等其他方法來補充Co-I
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• 求問WB 的目的蛋白分子量160kDa，轉膜條件怎麼設定
在進行Western Blot（WB）分析時，如果目標蛋白的分子量為160 kDa，轉膜條件應該注意以下幾點： 1.膜材料： 對於大分子蛋白（如160 kDa），通常推薦使用PVDF（聚偏氟乙烯）膜，因為它具有更高的蛋白結合能力。 2.轉膜緩衝液： 使用含有適量甲醇的轉膜緩衝液。甲醇有助
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• 用sephadex g-100純化蛋白柱子很堵，流速極其慢，請問怎麼解決？
使用Sephadex G-100純化蛋白時，如果遇到柱子堵塞和流速極其慢的問題，可以嘗試以下幾種方法來解決： 1.檢查柱子的裝填： 確保Sephadex G-100介質在裝填時均勻且沒有空氣泡。如果存在空氣泡或裝填不均，柱子的流動性會受到影響。 2.調整樣品的體積和濃度：
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