蛋白分析FAQ彙總

• • WB實驗中，GAPDH正常，陽參也正常，就是樣品組目的條帶不出來是什麼原因引起的，有沒有大佬有過類似的問題

  如果出現以上情況可能有以下幾種原因： 1.目的蛋白的表達水平低： 如果樣品中目的蛋白的含量非常低，可能無法被檢測到。這可能是由於樣品的本質特性或樣品處理過程中蛋白丟失引起的。 2.抗體特異性問題： 使用的一抗或二抗可能對目的蛋白的識別能力不足。確保抗體的特異性和活性。如果可能，嘗試更換抗

• • WB結果分子量增加了20kDa,怎麼去磷酸化、去糖基化來驗證翻譯後的修飾

  Western Blot（WB）實驗中，若觀察到某蛋白的分子量相比預期增加了20kDa，這可能表明該蛋白經歷了翻譯後修飾。爲了驗證這一點，你可以採取以下步驟： 一、去磷酸化驗證 1.樣品準備： 首先，確保你有足夠的蛋白樣品。 2.選擇適當的磷酸酶： 通常使用鹼性磷酸酶（如Lambdap

• • WB實驗我需要有什麼準備?

  在進行Western Blot（WB）實驗之前，有幾個關鍵準備工作需要完成： 一、實驗設計: 確定目的蛋白和合適的抗體（一抗和二抗） 選擇合適的載入對照（如GAPDH、β-actin等） 確定樣品型別（細胞裂解物、組織提取物等） 二、樣品準備: 收集和製備

• • 請問怎麼用高效液相識別水體中藍綠藻的演替呀

  藍綠藻演替主要是指不同種類藍綠藻在水體中的優勢地位隨環境變化而發生的變化。使用HPLC進行此類研究的一般步驟如下： 1.樣品採集： 從不同的水體或同一水體的不同時間點收集水樣。 2.樣品處理： 透過離心、過濾等方法從水樣中分離藻類。 使用有機溶劑（如甲醇、乙腈或丙酮）提取藻類中的色

• • 怎麼驗證兩蛋白內源性相互作用啊

  驗證兩個蛋白之間的內源性相互作用可以透過多種生物化學和細胞生物學方法： 1.免疫共沉澱（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）: 這是一種常用的方法，透過使用針對一個蛋白質的特異性抗體來捕獲該蛋白質及其可能的相互作用夥伴。如果另一個蛋白質也被沉澱下來，這表明兩者之間可

• • sumo融合蛋白為什麼在鎳柱上酶切切不掉標籤？

  這種情況可能由幾個因素引起： 1.酶的活性不足： 使用的酶可能活性不高，或者已經失活。酶的活性可以受到多種因素影響，包括儲存條件、溫度、pH值等。建議檢查酶的質量和儲存條件，或者嘗試使用新鮮的酶。 2.酶的濃度不足： 可能酶的新增量不足，無法充分與蛋白接觸或者達到足夠的酶切效率。增加酶的

• • ip 實驗求助！input組目的蛋白為雙條帶，ip組拉下來是單條帶！

  在免疫沉澱（Immunoprecipitation, IP）實驗中，如果在input（輸入）組中觀察到目標蛋白為雙條帶，而在IP組中只拉下單條帶，可能是由於： 1、蛋白修飾： 在Input組中，目的蛋白可能存在不同的翻譯後修飾形式（如磷酸化、糖基化等），導致電泳遷移速度不同，形成雙條帶。而

• • sevga法脫蛋白，可以用抽濾除去蛋白沉澱嗎？

  可以的，Sevag法通常用於在含有蛋白質的液體樣品中去除蛋白。這種方法涉及到使用氯仿和異丙醇的混合溶劑，透過分解蛋白質來清除它們。而DNA或RNA等核酸則留在水相中。在此過程中，樣品中的蛋白質與氯仿和異丙醇反應，形成沉澱，然後可以透過抽濾或離心分離出來，從而清除樣品中的蛋白質。 百泰派克生

• • 用質譜檢測氨基酸的濃度為什麼需要很高

  使用質譜（Mass Spectrometry, MS）檢測氨基酸需要較高的濃度主要是因為： 1.檢測限制： 質譜儀的檢測靈敏度限制了它能檢測到的最低濃度。對於一些裝置，尤其是舊裝置或解析度較低的裝置，可能需要更高的樣品濃度才能獲得可靠的訊號。 2.訊號強度： 氨基酸的訊號可能相對較弱，尤

• • p62蛋白兩條帶可以用嘛？是p62蛋白被修飾了嗎？

  當Western Blot分析中觀察到p62蛋白出現兩條帶時，這可能表示p62蛋白髮生了一種或多種形式的翻譯後修飾。 第一種情況：P2蛋白髮生了翻譯後修飾 p62蛋白可能經歷了磷酸化、泛素化、糖基化等翻譯後修飾，這些修飾可以改變蛋白質的遷移率，導致電泳時出現多個條帶。例如，磷酸化會使蛋白質