怎麼確定乳醯化位點
乳醯化(Lactylation)是一種最近才被發現的蛋白質翻譯後修飾,其中乳酸透過一個共價鍵附加到蛋白質的賴氨酸殘基上。這種修飾在細胞代謝、特別是在乳酸代謝和免疫反應中扮演重要角色。乳醯化位點指的是蛋白質上發生乳醯化的特定賴氨酸殘基。
質譜分析是鑑定蛋白質乳醯化位點的黃金標準。透過分離和鑑定蛋白質或多肽片段,可以精確地確定乳醯化發生的特定氨基酸殘基。其大致步驟如下:
1.樣品準備:
選擇合適的細胞或組織樣本,通常需要確保足夠的乳酸代謝活性。
2.蛋白質提取與消化:
從樣品中提取蛋白質,並將其消化成肽段。
3.質譜分析:
使用液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)對肽段進行分析,以識別乳醯化修飾的肽段。
4.數據處理與分析:
使用專門的生物資訊學工具來處理質譜資料,識別乳醯化位點。這通常包括資料庫搜尋、肽段鑑定、修飾位點定位等步驟。
5.生物資訊學分析:
對乳醯化位點進行進一步的生物資訊學分析,比如功能註釋、結構分析、與已知翻譯後修飾的比較等。
6.實驗驗證:
使用如抗乳醯化特異性抗體的免疫印跡(Western blot)等方法對關鍵發現進行驗證。
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