WB實驗我需要有什麼準備?

在進行Western Blot（WB）實驗之前，有幾個關鍵準備工作需要完成：




一、實驗設計:

• 確定目的蛋白和合適的抗體（一抗和二抗）
• 選擇合適的載入對照（如GAPDH、β-actin等）
• 確定樣品型別（細胞裂解物、組織提取物等）




二、樣品準備:

• 收集和製備樣品（細胞培養、組織樣本等）
• 使用適當的裂解緩衝液裂解細胞或組織，提取蛋白
• 測定蛋白濃度（如Bradford、BCA蛋白測定法）




三、電泳準備:

• 準備SDS-PAGE凝膠（可以是預製凝膠或自制凝膠）
• 配製電泳緩衝液
• 準備樣品（加入樣品緩衝液並煮沸）




四、轉膜準備:

• 準備PVDF或硝酸纖維素膜
• 配製轉膜緩衝液
• 準備轉膜裝置（如半乾式或溼式轉膜系統）




五、膜阻斷和抗體孵育:

• 準備阻斷緩衝液（如5%脫脂奶粉或BSA溶液）
• 準備一抗和二抗溶液




六、檢測:

• 準備適合所用二抗的檢測系統（化學發光、熒光等）




七、其他材料和裝置:

• 微量離心管、移液器、熱塊或水浴、電泳槽、電源、膜夾持器、震盪器等。
• 實驗室通用耗材（手套、紙巾、洗滌液等）。




八、實驗記錄和資料分析:

• 準備實驗記錄本，詳細記錄實驗的每一步
• 確定資料分析的方法和軟體




在進行WB實驗之前，建議仔細閱讀相關的操作手冊，如果有必要，可以先進行小規模的預實驗來最佳化條件。對於實驗中可能出現的問題，準備一些排錯策略也是非常有幫助的。




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