蛋白分析FAQ彙總

• • 蛋白質電泳時接錯電泳儀正負極會發生什麼？

  當蛋白質電泳時，如果接錯了電泳儀的正負極，會導致反向遷移：正常情況下，蛋白質在電場作用下會從陰極（負極）向陽極（正極）遷移。如果接錯了正負極，電場方向會反轉，導致蛋白質反向遷移。這會導致蛋白質在凝膠中的位置與正常情況下相反，直接跑出凝膠進入緩衝液了 百泰派克生物科技——生物製品表徵，多組學

• • 蛋白免疫印跡實驗裡最重要的操作是什麼？

  蛋白免疫印跡（Western Blot）實驗包含多個關鍵步驟，每個步驟都非常重要，並且相互依賴。不過如果非要選出最重要的操作，可能以下幾個步驟可以被考慮： 1.蛋白樣品的製備： 確保樣品中蛋白的完整性和濃度是關鍵的第一步。否則，在後續步驟中可能不會檢測到目標蛋白。這個過程需要注意使用適當的

• • 請問蛋白質印記法實驗怎麼做？

  蛋白質印跡（Western Blot）實驗主要包括樣品準備、SDS-PAGE電泳、轉印、封閉、孵育特異性抗體、洗滌、髮色或發光等步驟： 1. 樣品準備: 從細胞或組織中提取蛋白質。 量化蛋白質，並將其與載入緩衝液混合。 2. SDS-PAGE電泳: 將樣品載入到聚丙烯醯胺凝膠中進行電

• • 在應用蛋白免疫印跡檢測EGFRvIII時，如何與野生型EGFR進行區分？？

  EGFRvIII是一種EGFR的突變體，它在多種癌症中高度表達，包括膠質瘤和非小細胞肺癌。與野生型EGFR相比，EGFRvIII具有內部缺失的外顯子，導致其在細胞內穩定存在，並且具有持續的啟用狀態，這使得EGFRvIII成為一個重要的癌症治療靶點。 要區分EGFRvIII和野生型EGFR，

• • Western Blot 什麼情況會把膜上的蛋白洗掉？

  Western Blot 實驗時，有時會出現膜上的蛋白被洗掉的情況，可能是由這些原因導致的： 1.不正確的洗滌條件： 洗滌步驟是 Western Blot 實驗中非常重要的一步，它用於去除非特異性結合的抗體和其他非特異性的蛋白。如果洗滌條件不正確，比如洗滌緩衝液的濃度過低或過高，洗滌時間過

• • western blot沒有加蛋白上樣loading buffer就煮沸是不是樣品就不能用了？

  當進行Western blot實驗時，加入loading buffer是爲了使蛋白質變性以便在電泳過程中穩定蛋白質的結構，並且在轉膜和免疫檢測過程中提供視覺化的標記。loading buffer通常包含一些成分，如SDS（十二烷基硫酸鈉）、甘油、β-巰基乙醇和染料等。 如果沒有加入load

• • 17k的蛋白在western blot轉膜的時候電流和時間要多少？對pvdf膜有什麼要求？

  Western blot轉膜時電流和時間的設定是根據所轉膜的蛋白的大小和性質來確定的。對於17kDa的蛋白來說，可以參考以下建議： 1.電流設定： 一般來說，較低的電流可以減少蛋白的熱失活和電泳緩衝液的蒸發。對於小分子量的蛋白，常見的電流設定為20-30 mA。 2.轉膜時間： 轉膜時間

• • 為什麼western blot有一步操作要測定組織中的蛋白質濃度?

  測定組織中的蛋白濃度主要有以下作用： 1.確定樣品的相對蛋白質含量： 測定組織中的蛋白質濃度可以幫助確定樣品中的相對蛋白質含量。在Western blot實驗中，我們通常會將不同樣品進行比較，例如對照組和實驗組。透過測定組織中的蛋白質濃度，我們可以確定載入到凝膠中的蛋白質量，從而確保在We

• • WB取材時，組織塊用無酶水洗了一下，對後續蛋白實驗有影響嗎？

  無酶水是一種無酶活性的緩衝液，通常用於洗滌組織塊或細胞，以去除可能存在的外源性蛋白質、細胞外基質和其他汙染物。無酶水的使用可以減少後續蛋白質實驗中的非特異性背景訊號，並提高實驗的特異性和準確性。 在一般情況下，用無酶水洗滌組織塊不會對後續的蛋白實驗產生明顯的影響。洗滌組織塊的目的是去除可能

• • 跑WB來檢驗小鼠脂肪肝在打某種抗體後是否減輕，應該跑哪幾個蛋白?

  當我們想要透過WB來檢驗小鼠脂肪肝在打某種抗體後是否減輕時，可以檢測以下與脂肪肝相關的蛋白： 1.脂肪代謝相關蛋白： 脂肪肝是由於脂肪代謝紊亂導致的，因此可以檢測一些與脂肪代謝相關的蛋白，如脂肪酸合成酶（Fatty Acid Synthase，FAS）、脂肪酸氧化酶（Fatty Acid