請問蛋白質印記法實驗怎麼做？

蛋白質印跡（Western Blot）實驗主要包括樣品準備、SDS-PAGE電泳、轉印、封閉、孵育特異性抗體、洗滌、髮色或發光等步驟：




1. 樣品準備:

• 從細胞或組織中提取蛋白質。
• 量化蛋白質，並將其與載入緩衝液混合。




2. SDS-PAGE電泳:

將樣品載入到聚丙烯醯胺凝膠中進行電泳，使蛋白質按照大小分離。




3. 轉印:

將分離的蛋白質從凝膠轉移到聚酯膜或硝酸纖維素膜上，通常使用溼式或半溼式轉印。




4. 封閉:

使用一種不特異的蛋白質或其他封閉劑（如脫脂奶粉或BSA）處理膜，以阻止非特異性蛋白質-抗體結合。




5. 抗體孵育:

• 使用特異性的一抗孵育膜，通常在4°C下孵育過夜或室溫下孵育1-2小時。
• 清洗膜，去除未結合的抗體。
• 接著使用與初級抗體結合的二級抗體孵育膜。二級抗體通常與一個可以檢測的標籤（例如酶或熒光分子）結合。




6. 髮色或發光檢測:

根據使用的二抗型別（例如，是否與酶或熒光染料標記），選擇適當的檢測方法。常見的方法包括化學發光和熒光檢測。




7. 分析結果:

使用成像系統捕獲膜上的影象，並使用適當的軟體分析資料。




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