蛋白分析FAQ彙總
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• 差異凝膠電泳2D-DIGE進行定量蛋白質組學分析的精確度如何?
由於極高的光斑解析度,差異凝膠電泳2D DIGE非常準確。可以檢測到小至 10% 的蛋白質表達差異。 相關服務: 二維凝膠電泳服務
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• 差異凝膠電泳2D-DIGE在進行定量蛋白質組學分析的重現性如何?
高度可重複性:在同一凝膠上或跨不同凝膠上用不同 CyDye 標記的同一樣品上可以獲得相同的資料。 相關服務: 二維凝膠電泳服務
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• 差異凝膠電泳2D-DIGE進行定量蛋白質組學分析,可以檢測多少個蛋白點?
差異凝膠電泳2D DIGE 進行定量蛋白質組學分析時,如果使用 pH3-10 IPG 膠條檢測 2000-5000 個蛋白質斑點。如果使用額外的 IPG 膠條,例如 pH 4-7、pH 6-9 和 pH 7-11,可以檢測到超過 5000 個點。 相關服務: 二維凝膠電泳服務
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• 差異凝膠電泳2D-DIGE進行定量蛋白質組學分析,資料包告中包括哪些資訊?
差異凝膠電泳2D DIGE, 進行定量蛋白質組學分析後的資料包告一般包含兩個主要部分: ImageQuant 分析:單個樣品的凝膠影象和兩個樣品影象的疊加; DeCyder分析:對不同樣品之間的所有斑點進行定量分析和比較。 相關服務: 二維凝膠電泳服務
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• 為什麼要使用2D Wb來進行宿主殘留蛋白 HCP抗體覆蓋率檢測而不是 ELISA、LCMSMS 或 AAE?
透過2D Western blot 進行宿主殘留蛋白 HCP(Host Cell Protein)檢測,一般採用熒游標記進行,可以從同一凝膠和同一膜上生成 HCP 和 WB 影象。資料包告提供 HCP、Western 印跡和 HCP/Western 疊加影象,可以直接顯示 ELISA 或 L
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• 透過2D Wb進行宿主殘留蛋白 HCP檢測,1 次 HCP 分析測試可以分析多少個 HCP 樣品?
1 次 HCP 分析測試可進行 3 個樣品檢測。檢測報告中可提供不同 HCP 樣本的單個 HCP 影象和疊加影象,為您提供了其他平臺無法實現的 HCP 組成、修改和碎片的直接視覺化和比較。此外,定量分析提供點計數、相似性分析、總 HCP 和 DS 數量。 相關服務: 蛋白質免疫印跡和電轉
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• 透過2D Wb進行宿主殘留蛋白 HCP檢測,HCP斑點可以從大量原料藥(DS)中分離出來嗎?
答案是肯定的。根據原料藥的分子量和等電點,我們可以修改 IEF 和 2D 條件以實現 HCP 與 DS 的最佳分離。 相關服務: 蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• SWATH定量—為什麼不透過在 MS 和 MS/MS 級別對樣品中的每個離子進行測序來生成資料庫
理論上應該這樣做。 理想情況下,機器的速度足以在 0.7 Da 的小視窗中掃描整個 m/z 範圍,這對應於 MRM 視窗,並且是我們可以用四極杆隔離的最小視窗。掃描蛋白質通常的m/z範圍(從350到1250 m/z)代表了大約1285個獨立的0.7 Da視窗,在這個視窗中我們必須分離和破碎前
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• SWATH定量—是否可以透過將結果對映到理論資料庫上將離子與蛋白質聯絡起來?該對映是由MS/MS鑑定軟體完成的嗎?
可以,一旦IDA執行完成,每個離子的MS和MS/MS資訊都被對映到一個理論資料庫中,以確定樣品中存在的肽和蛋白質。這個過程可以透過幾種演算法完成,包括Mascot、OMSSA、ProteinPilot或多演算法介面,如搜尋GUI。 相關服務: SWATH定量蛋白組學服務
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SILAC即細胞培養條件下穩定同位素標記技術(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture),它可用於對培養細胞產生的多個樣品進行相對定量。在典型的SILAC實驗中,兩個細胞群在輕培養基或重培養基中生長,後者含有 15N/13C
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