為什麼要使用2D Wb來進行宿主殘留蛋白 HCP抗體覆蓋率檢測而不是 ELISA、LCMSMS 或 AAE?
透過2D Western blot 進行宿主殘留蛋白 HCP(Host Cell Protein)檢測,一般採用熒游標記進行,可以從同一凝膠和同一膜上生成 HCP 和 WB 影象。資料包告提供 HCP、Western 印跡和 HCP/Western 疊加影象,可以直接顯示 ELISA 或 LCMSMS 無法提供的全面抗體覆蓋率。此外,我們的大面積 2D 提供了 ELISA 或 LCMSMS 無法實現的 HCP 及其修飾形式的高解析度影象,大大提高了覆蓋的靈敏度和準確性。 AAE 基於在天然條件下與抗原的抗體免疫結合,在定量抗體覆蓋率方面存在侷限性: 假陽性:a) 與抗體結合蛋白直接或間接相關的蛋白;b) HCP 抗體中存在的抗原;c) HCP抗體中的共純化血清蛋白 假陰性:a) 蛋白質複合物可能會阻斷抗體結合;b) 一些結合的 HCP 或其降解片段無法洗脫 此外,AAE 還需要與下游 LCMSMS 或 2D Western blot 結合,這樣冗長的過程會引入更多的變化和不一致。
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