蛋白分析FAQ彙總

• • wb實驗中目的蛋白為什麼比預期低?

  Western Blot實驗中，目的蛋白表達比預期低的原因可能有以下幾個方面： 1.蛋白提取問題： 蛋白提取不完全：你可能沒有完全破裂細胞，使得一部分蛋白沒有被提取出來，嘗試更改細胞破裂方法，例如使用更有效的破裂試劑或使用超聲波破裂。 蛋白降解：在蛋白提取過程中，蛋白可能被酶降解。確保

• • 蛋白質純化方法，有知道的嗎 ?

  蛋白質純化是一種基本的實驗手段，用於提取並純化我們感興趣的蛋白質，並獲取足夠多、足夠純的蛋白質樣本。以下列出了幾種常用的蛋白質純化方法： 1.沉澱法： 這種方法主要利用蛋白質在特定pH、電解質濃度、溫度、有機溶劑等條件下的可溶性差異進行沉澱分離。最常見的蛋白沉澱劑包括硫酸銨、醋酸、PEG等

• • 兩個蛋白直接相互作用的檢測方法有哪些？

  當兩種蛋白質直接相互作用時，會對它們的生物功能產生影響。在生物藥物研發或者生物科技領域中，瞭解和鑑定這種蛋白質間的相互作用是非常重要的。以下是一些常用的檢測蛋白相互作用的方法： 1. 共免疫沉澱 (Co-Immunoprecipitation, Co-IP) Co-IP是一個在液體培養體

• • 怎麼研究互作蛋白間相互作用的具體機制？

  蛋白質間的相互作用是生物體內許多生物學過程的基礎，例如訊號傳導，免疫反應和DNA修復。 研究這些相互作用的具體機制可以幫助我們理解這些過程是如何發生的，以及在疾病狀態下它們是如何出錯的，這對於藥物研發是至關重要的。 研究蛋白質-蛋白質相互作用的技術有許多，要確定最適合的方法可能取決於具體的

• • 常用的蛋白質分離鑑定的方法有哪些？

  蛋白質分離鑑定的方法有很多種，每種方法都有其特點和應用。 1.色譜法 這是一種最常用的蛋白質分離技術，包括凝膠滲透色譜、離子交換色譜和親和色譜。這種方法通常被用於純化蛋白質，並可分離出具有特定性質的蛋白質。 2.電泳法 電泳法包括聚丙烯醯胺凝膠電泳（PAGE）、二維電泳、等電聚焦電泳

• • Pull down檢測有什麼優勢？用Western Blot嗎？

  Pull Down檢測的優勢： 特異性強：Pull down驗證一個蛋白是否與另一個特定蛋白互作時，由於使用的是特異性高的抗體，檢測結果的特異性比較強，降低了假陽性的風險。 簡單快速：Pull down實驗相對一些複雜的肽段互作分析，操作更加簡潔和快速，而且易於大量重複實驗，檢測結

• • 請問IP-MS資料中，轉染的目的蛋白丰度較低正常嗎？

  在IP-MS（免疫沉澱-質譜）資料中，轉染的目的蛋白丰度較低是可能的，這可能是由多種因素導致的。比如： 1.轉染效率：轉染效率是影響目的蛋白丰度的關鍵因素。如果轉染效率較低，那麼目的蛋白的表達量也會相應較低。因此，最佳化轉染條件以提高轉染效率是非常重要的。 2.蛋白穩定性：目的蛋白的穩定

• • 在蛋白互作研究中，蛋白質晶片和co-IP，誰更有優勢呢？

  蛋白質晶片和co-IP（共沉澱實驗）都是在蛋白質互作研究領域廣泛應用的技術。它們各自具有其優點和侷限性，我們可以根據實驗需求選擇使用哪一種。 一、蛋白質晶片（Protein microarrays）: 1.優點 蛋白質晶片一次可以分析千上萬種蛋白質樣品的相互作用。它以高通量、高效

• • 做WB實驗，蛋白電泳，藍色指示劑有時候是很細的條帶，有時候彌散成很寬的條帶，這是為什麼呢？

  這個問題是關於Western blot實驗中，電泳跑膠過程的把控以及染色效果的疑惑。如果你注意到你的藍色指示劑有時候呈現很細的帶狀，有時候彌散成很寬的帶，這可能跟多個因素有關。我會列舉每一個可能的原因，並給出相應的解決策略。 1.樣品處理不當：如果蛋白樣品沒有充分的顯色，或者顯色不均勻，會

• • 雙向電泳在蛋白質組學中的應用？

  雙向電泳在蛋白質組學中有著重要的應用，它的運用可以大幅提高蛋白質分析的複雜度以及解析度。以下是關於其在蛋白質組學中的幾個主要應用： 1.蛋白質分離和鑑定：使用雙向電泳，我們可以根據蛋白質的等電點和分子量來進行分離。在第一維中，以等電點為分離基準；在第二維，按分子量分離。這種方法可以分離出數