兩個蛋白直接相互作用的檢測方法有哪些?
當兩種蛋白質直接相互作用時,會對它們的生物功能產生影響。在生物藥物研發或者生物科技領域中,瞭解和鑑定這種蛋白質間的相互作用是非常重要的。以下是一些常用的檢測蛋白相互作用的方法:
1. 共免疫沉澱 (Co-Immunoprecipitation, Co-IP)
Co-IP是一個在液體培養體系中鑑定蛋白相互作用的經典方法。它包括使用特異性抗體沉澱目標蛋白,然後透過免疫印跡(western blot)檢測預先沒知道可能會與目標蛋白相互作用的蛋白質。
2. 雙雜交系統
如果你想在細胞環境中發現新的蛋白質相互作用,而且你只知道一個蛋白質,雙雜交系統是一個有效的工具。酵母雙雜交可能是最常用的,但是目前已經有了用於其他生物如昆蟲細胞和哺乳動物細胞的系統。
3.親和層析(Affinity Chromatography):
親和層析(Affinity Chromatography):利用蛋白質間的特異性結合,將一個蛋白質固定在某種固相支援上,然後透過該固相將與其相互作用的蛋白質從混合物中分離出來
4. 酵母三雜交
酵母三雜交用於在體外檢測RNA與蛋白的互動。它可以輔助醫學專業識別RNA互動蛋白,或者鑑定RNA存在於細內的特定位置。
5. 熒光共振能量轉移 (Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)
FRET透過檢測已經標記的兩種蛋白在特定種情況下的發光能力變換,從而瞭解蛋白間的相互作用程度。
這些方法各有優缺點,可以根據研究目的和樣本特性選擇適合的方法。同時,綜合多種方法的結果可以提高對蛋白質間相互作用的準確性和可靠性。
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