做WB實驗,蛋白電泳,藍色指示劑有時候是很細的條帶,有時候彌散成很寬的條帶,這是為什麼呢?
這個問題是關於Western blot實驗中,電泳跑膠過程的把控以及染色效果的疑惑。如果你注意到你的藍色指示劑有時候呈現很細的帶狀,有時候彌散成很寬的帶,這可能跟多個因素有關。我會列舉每一個可能的原因,並給出相應的解決策略。
1.樣品處理不當:
如果蛋白樣品沒有充分的顯色,或者顯色不均勻,會導致染色物的擴散。此外,如果你使用的是非常濃度的樣品,可能會使得試劑在電泳過程中無法將蛋白質分散開來。
解決策略:
改變樣品處理的方法,確保樣品的溶解完全,控制好樣品濃度。
2.電泳條件不適宜:
電泳時間太長,電流過大,或者電泳時膠的濃度不適合用於你的樣品,使用者的設定電壓也未達到理想效果或者過高,都可能會使得蛋白帶變寬或者出現斑點狀的擴散。
解決策略:
調整適當的電泳條件適配你對蛋白分離度和解析度的需求。
3.膠體質量問題:
如果在準備聚丙烯醯胺凝膠的過程中,混合不均勻或者出現氣泡,都可能會導致電泳後蛋白帶的質量下降,呈現擴散的情況。
解決策略:
在製備凝膠的過程中,需要充分混合並排除氣泡。
4.顯色時間短或過長:
顯色時間如果過短,有可能造成蛋白帶不夠清晰,不易辨別;如果過長,也可能會導致具有擴散現象,影響後續結果的觀察與分析。
解決策略:
根據實驗室的操作經驗,選擇適當的顯色時間。
這些都可能是導致電泳結果效果不佳的原因,希望以上的分析和解決策略可以幫助改善實驗的效果。
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