蛋白分析FAQ彙總

• • WB的泳道背景比較黑，接近灰色是為什麼啊？

  Western blot泳道背景變黑或接近灰色通常是由於以下幾個原因造成的： 1.過度曝光： 如果曝光時間太長，膠片或成像系統可能會捕捉到過多的訊號，導致背景變暗。 2.膜處理不當： 在轉移或阻斷步驟中，如果膜處理不當，比如阻斷不充分，可能會導致非特異性結合，使背景變暗。 3.抗體濃度

• • 小分子蛋白（10KD）WB實驗電泳液中不加SDS，但是wb不就是依靠SDS聚丙烯凝膠電泳的嗎？如果不加SDS，是用tris填平嗎

  小分子蛋白（10KD）在進行Western Blot（WB）實驗時，通常確實使用SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）。SDS是一種表面活性劑，它的作用是使蛋白質變性並賦予蛋白質負電荷，使蛋白質按照大小進行分離。 如果你在電泳過程中不加SDS，蛋白質將不會完全變性，這意味著蛋白質的電

• • 兔多抗用溴化氫瓊脂糖凝膠純化沒有成功是什麼原因？一般怎麼驗證抗原偶聯上了？

  使用溴化氫瓊脂糖凝膠純化兔多抗失敗可能有多方面的原因，比如： 1.凝膠本身的問題： 凝膠的特性可能不適合所用的抗原或抗體，不同的凝膠有不同的孔隙大小和親和力特性，確保使用的瓊脂糖凝膠適合於你的實驗。 2.偶聯效率低合： 如果抗原和載體（如瓊脂糖珠）的偶聯效率不高，可能導致目標抗體的親和力

• • hplc怎麼將遊離氨基酸和結合氨基酸分開測定

  高效液相色譜（HPLC）分離遊離氨基酸和結合氨基酸主要是基於它們在分子大小、溶解性和親疏水性等方面的差異。遊離氨基酸是單個的小分子，而結合氨基酸通常存在於蛋白質或多肽中，這些大分子在大小和形態上與遊離氨基酸有顯著差異。這使得它們在色譜柱中的行為不同。大分子在色譜柱中的洗脫時間比小分子短，因此

• • wb蛋白鑑別實驗凝膠脫色後 marker泳道相比於樣品泳道背景更透明

  在Western Blot (WB) 蛋白鑑別實驗中，凝膠脫色後發現marker泳道相比於樣品泳道背景更透明，是實驗過程中常見的現象，通常是由幾個因素造成的： 1.蛋白質濃度差異： 樣品中的蛋白質濃度可能遠高於marker。在染色和脫色過程中，高濃度的蛋白質可能導致更強的染色，相應地，在脫

• • 蛋白純化時，老是掛不上柱子是為什麼呢？

  在蛋白純化過程中，如果蛋白質不能有效地吸附到柱子上，可能有幾個原因： 1.緩衝液pH不適宜： 蛋白質的結合通常取決於其等電點和緩衝液的pH。如果pH不適宜，蛋白質可能無法正確結合。 2.鹽濃度過高或過低： 鹽濃度會影響蛋白質的溶解度和結合能力。如果鹽濃度不適宜，可能會阻礙蛋白質的吸附。

• • WB腸組織蛋白提取上清黃色正常嗎？

  在Western Blot（WB）實驗中，腸組織蛋白提取的上清呈現黃色是正常的情況。這種黃色通常來源於組織中的膽汁色素，這些色素可以使蛋白提取液呈現黃色。然而，需要注意的是，樣品的顏色並不直接影響Western Blot實驗的結果，更重要的是確保蛋白提取和濃度測定的正確性。如果有其他異常現象

• • 蛋白上樣緩衝液HU buffer室溫放置幾小時會有影響嗎

  蛋白上樣緩衝液（HU buffer）放置在室溫下幾小時通常不會對其效能產生重大影響。這種緩衝液通常包含有助於維持蛋白質穩定性的成分，如還原劑和防止蛋白降解的物質。然而，長時間的室溫暴露可能會降低其效率，尤其是如果緩衝液中包含敏感的還原劑，如DTT或β-巰基乙醇。爲了保證最佳效果，最

• • WB條帶周圍一圈淺，中間黑是什麼原因

  WB（Western Blot）條帶周圍淺色而中間較黑的現象通常是由於蛋白質過載或者檢測過敏所致。當樣品中蛋白質含量過高，超出了膜的結合能力或者檢測系統的線性範圍時，就可能出現中間較黑而邊緣較淺的條帶。這種情況下，中心部分的蛋白質過多，導致抗體飽和，而邊緣處蛋白質相對較少，抗體結合不飽和，因

• • 小腸蛋白應該怎麼提取？想檢測小腸zo1表達水平，應該取小腸哪一部分合適？

  一、蛋白質提取 1、樣品製備 將選定的小腸部分從實驗動物中切除，並立即放入冷的生理鹽水中以清洗掉殘留的內容物。 2.組織均質化 使用均質器將小腸組織均質化。在此步驟中，組織被物理破碎，使得細胞內部的蛋白質可以釋放到緩衝液中。 使用適合的緩衝液，例如含有抗蛋白酶抑制劑的磷酸鹽緩衝液（PB