小腸蛋白應該怎麼提取？想檢測小腸zo1表達水平，應該取小腸哪一部分合適？

一、蛋白質提取




1、樣品製備

將選定的小腸部分從實驗動物中切除，並立即放入冷的生理鹽水中以清洗掉殘留的內容物。




2.組織均質化

• 使用均質器將小腸組織均質化。在此步驟中，組織被物理破碎，使得細胞內部的蛋白質可以釋放到緩衝液中。
• 使用適合的緩衝液，例如含有抗蛋白酶抑制劑的磷酸鹽緩衝液（PBS）或特里同X-100，以防止蛋白質降解。




3.離心

將均質物透過離心分離，以去除未破碎的細胞和組織碎片。通常在4°C下高速離心約10-15分鐘。




4.蛋白質濃縮和純化

收集含有蛋白質的上清液。此時，可以使用鹽沉澱、透析或蛋白質純化柱等方法進一步純化和濃縮蛋白質。




將提取的蛋白質在適當的條件下儲存，如-80°C冰箱中，以防止蛋白質降解。




二、小腸樣品擷取

一般來說，小腸由十二指腸、空腸和迴腸組成。ZO-1蛋白在整個小腸上皮細胞中均有表達，但其表達水平可能在不同部位有所不同。爲了特定的實驗目的，建議選擇空腸部分，因為空腸是吸收營養和水分的主要部位，上皮細胞結構和功能保持較為一致。




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