蛋白分析FAQ彙總

• • 兩個蛋白有互作，加到緩衝液裡共同孵育，緩衝液：蛋白1：蛋白2的體積配比應該是多少

  兩個蛋白質進行相互作用實驗時，緩衝液與蛋白質的體積比通常取決於需考慮多個因素，包括蛋白質的濃度、活性、相互作用的型別和強度，以及實驗的特定目的。沒有統一的“一刀切”配比。 一、配比的選擇： 一個常見的起點是使用等摩爾的蛋白質，即蛋白1和蛋白2的摩爾濃度相同。例如，如

• • SDS-PAGE電泳marker背景相比於樣品背景更加透明，脫色脫的更乾淨是什麼原因

  SDS-PAGE電泳中marker（標記物）背景比樣品背景更透明、脫色更乾淨主要是由於： 1.蛋白濃度差異： Marker通常是純化的蛋白，濃度較低，而樣品中的蛋白可能濃度較高。高濃度蛋白在電泳後更難脫色。 2.樣品的其他成分： 樣品中除了蛋白質外，還可能含有影響染色和脫色的其他成分，如

• • 蛋白質組學裏麵檢索資料庫要怎麼選擇？

  蛋白質組學研究中選擇合適的蛋白質資料庫是關鍵一步，因為它直接影響到質譜資料的解析和鑑定的準確性。一些常用的蛋白質資料庫及其適用情形如下： 1.UniProt (Universal Protein Resource)： 這是最全面的蛋白質資料庫之一，包含了大量物種的蛋白質序列資訊。適用於多種

• • 拿到蛋白質組資料後，應該怎麼分析，裡面什麼都有，我要做的是什麼？

  拿到蛋白質組學資料後，您可以進行一系列分析來提取有意義的生物學資訊。蛋白質組學資料分析的步驟和具體目標可能會根據您的研究目的和資料型別（如質譜資料、蛋白晶片資料等）而有所不同。 1.質量控制： 檢查資料質量，確保沒有技術誤差。 2.蛋白鑑定： 使用質譜軟體與蛋白質資料庫匹配，鑑定樣本中的

• • 轉膜marker顏色很淺 且感覺條帶飛了 是為什麼

  WB轉膜出現以上情況可能是由下面幾個因素造成的： 1.膜轉移效率不足： 如果膜轉移效率不高，可能會導致marker顏色淺。這可能是由於電轉膜的電壓或時間設定不當，或者使用的膜與蛋白質的親和力不足。 2.樣品過載或電泳條件不當： 如果樣品載入過多或電泳條件不適宜（如電壓過高或執行時間過長）

• • WB蛋白塊，每個顏色都是兩邊深中間淺請問是啥原因？

  在Western Blot (WB) 分析中，如果出現蛋白帶兩邊深中間淺的現象，最可能的原因是樣品過載。當在凝膠槽中載入的蛋白質量超過了其分離能力時，蛋白質在電泳過程中可能無法均勻遷移，尤其是在凝膠的中心部位。這會導致蛋白在邊緣處遷移得更快或更遠，造成帶的中間部分相對較淺。

• • 請問WB實驗封閉時轉速被誤調為130r，對結果會有影響嗎?

  在Western Blot實驗中，如果封閉（阻塞）步驟的轉速被誤設為130 rpm，一般情況下對實驗結果的影響不大。封閉步驟的主要目的是阻止非特異性抗體結合，而這一過程主要取決於阻塞劑的型別和濃度，以及封閉時間的長度。 轉速的調整主要是爲了確保阻塞劑在膜上均勻分佈，避免出現幹斑或未覆蓋區域

• • WB實驗趨勢不一致怎麼辦？

  Western Blot（WB）實驗中趨勢不一致通常指的是重複實驗之間結果差異較大。應對這一問題時，主要策略是仔細檢查實驗的各個步驟，以確保一致性和準確性。具體措施包括： 1、樣品製備： 確保樣品的蛋白質濃度一致。使用蛋白酶抑制劑以防止蛋白質降解。確保樣品在實驗過程中的處理方式一致。 2

• • wb在轉膜過程中電壓如果過低會導致什麼結果

  1.轉移效率低下： 電壓是推動膜材料從一個表面轉移到另一個表面的驅動力。如果電壓太低，可能不足以有效地完成這個過程，導致轉移效率降低。 2.不均勻的轉移： 由於電壓不足，膜材料可能無法均勻地轉移，這可能導致轉移後的膜出現厚薄不一、缺陷或瑕疵等問題。 3.膜質量差： 膜的完整性和均勻性對於

• • 樣品寄送過程,哪些需要低溫?哪些需要乾冰?哪些常溫就可以?

  樣品寄送的溫度要求主要取決於樣品的性質。下面是一些常見的樣品型別及其相應的溫度要求： 1.生物樣品（如血液、細胞、組織）： 這些樣品通常需要在低溫下運輸，以防止細胞活性的喪失或分解。它們通常需要乾冰或者液氮來保持低溫。 2.化學試劑： 某些化學試劑在常溫下可能會分解或反應，因此需要低溫儲