蛋白分析FAQ彙總
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• SILAC 蛋白質中重氨基酸的摻入量很低，應該檢查什麼？
我們建議驗證沒有輕賴氨酸（和/或精氨酸）和透析胎牛血清的 SILAC 培養基用於細胞培養。此外，驗證培養的細胞在 SILAC 培養基中是不是健康的、有活力的、積極生長的，並且沒有微生物汙染。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ，TMT，SILAC
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• 有很好的肽識別號，但樣品重複之間的差異很大。您對提高樣品重現性有何建議？
我們建議檢查您的樣品製備工作流程，以確保一致的蛋白質提取、還原/烷基化、消化和淨化。建議進行高質量、可重複的樣品製備流程。相關服務:蛋白分析
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2D 蛋白質凝膠電泳是蛋白質在二維空間上的分離。在第一維中，透過等電聚焦將蛋白質按等電點 (pI) 進行分離，在第二維中，透過 SDS-PAGE 將蛋白質按質量進行分離。相關服務:二維凝膠電泳服務
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蛋白質二維凝膠電泳的主要應用和優勢如下： 應用 比較蛋白質組學：識別和分析複雜蛋白質混合物之間的差異； 蛋白質分析，生物標誌物發現； 蛋白質變體和亞型的分離和分析； 優點 同時分離數百到數千種蛋白質； 高容量和高解析度； 相容質譜用於蛋白質鑑定和測序的進一步分析； 能夠分離和分析低丰度蛋白質
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兩性電解質是同時包含酸性和鹼性基團的分子（因此是兩性的），並且在一定的 pH 值範圍內主要以兩性離子的形式存在。平均電荷為零時的 pH 值稱為分子的等電點（pI）。兩性電解質用於建立穩定的 pH 梯度，用於等電聚焦。在含有兩性電解質的凝膠中，施加電場時會建立線性 pH 梯度。兩性電解質分子攜
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烷基化透過烷基化半胱氨酸來防止不需要的蛋白質修飾，以避免混合二硫鍵的形成和再氧化，並允許更清晰的聚焦。相關服務:二維凝膠電泳服務
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等電聚焦電泳 (IEF) 是一種基於等電點 (pI) 分離蛋白質的電泳技術。pI 是指蛋白質不帶淨電荷並且在電場中不移動的 pH 值。IEF 凝膠有效地產生了一個 pH 值梯度，因此蛋白質根據其獨特的 pI 被分離。相關服務:二維凝膠電泳服務
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具體的研究目標通常對最佳化實驗設計至關重要。例如，細胞內目標蛋白質的丰度可能決定了實驗平臺的選擇或用於獲取資料的儀器時間。每個實驗條件包含的生物重複數也非常重要。對於定量分析，至少三個重複是必不可少的，在許多情況下建議五個重複或更多。相關服務:組學分析
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選擇 TMT（串聯質量標籤）還是 DIA（資料獨立採集）分析取決於您有多少樣品以及您想要識別多少蛋白質。TMT 分析最適合最大化蛋白質組學深度或磷酸化蛋白質組學分析，但在超過 20 個樣本時不實用。DIA 分析最適合包含數十個或數百個樣本的大型實驗。相關服務:定量蛋白組分析
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HPLC 的分離原理基於樣品化合物在流動相（來自泵）和固定相（在色譜柱中）之間的分佈。當透過色譜柱時，化合物基團與固定相的相互作用不同，並根據化學性質被保留，因此發生分離。相關服務:蛋白質質譜鑑定
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