蛋白分析FAQ彙總
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泵輸送流動相透過裝有固定相的色譜柱。自動進樣器將樣品注入色譜柱。固定相分離樣品化合物或分析物。檢測器測量從色譜柱分離和洗脫後的分析物。相關服務:蛋白質質譜鑑定
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大多數 HPLC 檢測器透過將分析物的物理化學特性轉換為電訊號來工作。相關服務:蛋白質質譜鑑定
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HPLC檢測器種類繁多。常用的有紫外-可見、熒光、質譜、帶電氣溶膠、蒸發光散射和折光率檢測器。相關服務:蛋白質質譜鑑定
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鹽、緩衝液、洗滌劑和其他小分子會干擾液相色譜分離和質譜儀源電離。相關服務:蛋白質質譜鑑定
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對於蛋白質樣品,Pierce 聚丙烯醯胺旋轉脫鹽柱(Thermo Fisher)可用於去除鹽和其他小分子量的汙染物。如果蛋白質含量低,建議使用丙酮沉澱法,前提是樣品至少有10µg。對於源自蛋白質消化物的肽樣品,可使用 Pierce Peptide Desalting Spin Columns
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不可以。蛋白質脫鹽柱(例如 Zeba 脫鹽柱)使用尺寸排阻,並且具有對於肽樣品而言通常過高的分子量截止值。肽脫鹽使用反相色譜樹脂(例如 C18 樹脂)結合肽,以在洗滌過程中去除鹽分。相關服務:多肽組學
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使用丙酮沉澱、透析等較容易在蛋白質水平上去除洗滌劑。相關服務:蛋白質質譜鑑定
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大多數有機溶劑或揮發性緩衝液與 LC-MS 相容。水和含 0.1% 甲酸的乙腈是質譜分析中分離肽樣品最常用的溶劑系統。三氟乙酸 (TFA) 是一種用於離線肽 C18 淨化或 LC-UV 分析的替代離子配對劑。相關服務:多肽質譜鑑定
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• 如果已經在蛋白質水平上去除了小的汙染物和洗滌劑,還需要在質譜分析之前對肽進行脫鹽嗎?
需要。我們建議在蛋白質消化後進行額外的淨化,以去除任何殘留的鹽或部分消化的蛋白質。相關服務:蛋白質質譜鑑定
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• 使用 C18 或脫鹽柱淨化肽樣品丟失了大部分肽,是什麼地方出了錯?
在中性 pH 或存在有機溶劑(例如乙腈)的情況下,肽不能很好地與反相樹脂結合。在脫鹽之前,使用甲酸或三氟乙酸 (TFA) 將蛋白質消化樣品酸化至 pH <3。透過將樣品乾燥,確保樣品在清潔前後不含有機溶劑。相關服務:多肽組學
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