蛋白分析FAQ彙總

• • 在LC-MS/MS樣品製備和上機分析過程中是否會發生蛋氨酸氧化？

  樣品製備過程中蛋氨酸發生體外氧化是LC-MS/MS分析中一個十分常見的問題，大多數體外氧化發生在肽消化過程以及電噴霧電離過程中。相關服務:蛋白質質譜鑑定

• • 為什麼要將蛋白質消化成肽進行液相色譜-質譜分析，而不是直接分析蛋白質？

  雖然質譜儀可以測量完整蛋白質的質量，但在蛋白質組學中分析肽而不是蛋白質的原因有很多：1、蛋白質可能難以處理，並且在相同的條件下可能並不都是可溶的。2、此外，質譜儀對蛋白質的靈敏度遠低於對肽的靈敏度，並且蛋白質可能被處理和修飾，使得組合效應使得無法確定許多所得同種型的質量。此外，從序列中預測成

• • 什麼是蛋白免疫印跡（Western Blot）？

  蛋白質免疫印跡是細胞和分子生物學中一種流行的技術，用於檢測從細胞或組織中提取的特定蛋白質的存在。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務

• • 如何選擇蛋白印跡使用的膜？

  在選擇膜時，要考慮膜的型別以及孔徑等因素。與硝化纖維素膜（80-100mg/cm2）相比，PVDF膜具有更大的蛋白質結合能力（170-200mg/cm2），因此PVDF更適合用於檢測低丰度的蛋白質，但使用此膜可能會導致更高的背景。PVDF和硝化纖維素膜的典型孔徑為0.1、0.2或0.45mm

• • 免疫印跡有哪些檢測方法？

  蛋白質印跡檢測有三種不同的方法：化學發光法、化學熒光法和熒光法。化學發光是較常用的檢測方法，透過酶（如辣根過氧化物酶HRP）和化學發光分子（如魯米諾）之間發生的化學反應發光，這種發光可以用CCD成像儀檢測。化學熒光是一種結合熒光和化學發光的分子生物學和生物化學的替代標記和檢測方法。化學發光基

• • 你們能進行從頭測序嗎？

  可以。 使用產生高質量精度的前體（肽）和產物（肽片段）離子的儀器，可實現高質量的從頭測序。因此，我們將在 QExactive 上執行此類樣本。然後，最好使用 Peaks 7 9BSI 處理資料檔案，它在從離子系列中重建肽序列方面做得非常出色。 然而，即使有一套完整的胰蛋白酶肽，完全測序，也仍

• • 無標記（label-free）定量是否可行？

  這是一個棘手的問題。 質譜不是一種本質上的定量方法，且很難預測分析物與儀器中訊號強度之間的關係。 在將一組肽離子引入儀器時，這顯而易見。例如，在 MALDI-TOF 上，已知賴氨酸終止的肽比精氨酸終止的肽發出的訊號要弱得多（這個問題有辦法解決）。當將複雜的肽混合物電噴射到儀器的源中時，一些肽

• • FT-IR——什麼是化學成像？

  化學成像是在二維或三維影象中對樣品的化學性質進行空間解析的一種方法。使用這種技術，可以獲得有關被檢查樣品的材料特性、結構和來源的資訊。相關服務:蛋白質質譜鑑定

• • 什麼是 FT-IR 成像？

  FT-IR 成像是建立空間分辨化學影象的一種方法。這些影象的每個畫素都包含一個完整的紅外光譜。透過解釋各個光譜，可以檢測和評估感興趣的樣本區域。相關服務:蛋白質質譜鑑定

• • 如何建立 FT-IR 影象？

  常用方法是順序單點或線陣列測量，以及透過焦平面陣列 (FPA) 檢測器直接採集二維影象。雖然 FPA 檢測器提供了卓越的解決方案，但高度自動化的單點測量是一種經濟的替代方案。相關服務:蛋白質質譜鑑定