蛋白分析FAQ彙總
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• 誘導表達的蛋白上有sumo標籤,WB應該選擇sumo的哪個抗體呢?sumo1還是sumo2/3?
在Western Blot(WB)分析中,若你的誘導表達的蛋白上有SUMO標籤,選擇哪個SUMO抗體取決於你使用的是SUMO1還是SUMO2/3標籤。如果你的蛋白質是與SUMO1標籤化的,應該使用針對SUMO1的抗體。相反,如果使用的是SUMO2/3標籤,則應選擇針對
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• 在基因組中“搜尋蛋白質序列的相似片段”這種識別基因的方法有什麼優缺點呀?
在基因組中搜索蛋白質序列的相似片段作為識別基因的方法具有以下優缺點: 一、優點: 1.高通量和自動化: 基於計算機的序列比對工具如BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)可以快速、大規模地搜尋大型基因組資料庫。 2.高度特異性: 蛋白質序列具有高度
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• pmp柱前衍生化然後進行高效液相測定單糖組成,需要注意些什麼呢?要不要做方法學驗證?
在使用 PMP (1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮) 標記法對單糖進行柱前衍生化並透過高效液相色譜(HPLC)進行分析時,需要注意以下幾個關鍵點: 1.衍生化條件: 確保衍生化反應條件(如溫度、時間、pH值)適當,以便高效完成單糖的PMP衍生化。 2.樣品準備: 樣品必須準確、乾淨。應避
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• DIA做交替採集時,是先把所有視窗的一級全採完,再到高碰撞能去採所有視窗的二級,還是一級二級,一級二級....這樣採集呢?
在資料獨立採集的過程中,通常是先採集所有設定視窗的一級質譜(MS1),然後再採集所有視窗的二級質譜(MS2)。這個過程是按照視窗依次進行的,而不是交替進行一級和二級質譜的採集: 具體來說,流程通常是這樣的: 1.一級質譜採集: 首先,進行一級質譜的全掃描,覆蓋整個質量範圍。 2.二級質
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在使用氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)進行糖苷鍵檢測之前,對樣品進行甲基化和糖醛酸還原是重要的步驟。甲基化是用來保護糖苷鍵不在隨後的分析中被破壞。它透過替換糖分子中的羥基(-OH)為甲基(-CH3),增加了分子的穩定性。糖醛酸(如葡萄糖醛酸)在GC-MS分析中可能不穩定,因此需要將其還原為對
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• 請問對樣品溶解的緩衝液有什麼要求嗎?10mM Tris可以嗎?
對於樣品溶解的緩衝液,重要的是確保它適合您的實驗需求。10 mM Tris緩衝液通常是一個良好的選擇,因為它提供穩定的pH環境並且對大多數生物分子是溫和的。然而,也需要考慮以下因素: 1.pH值: 確保Tris緩衝液的pH適合您的樣品。Tris在pH 7.0-9.0範圍內效果最佳。 2.
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• DIA怎麼做到交替採集?是先全掃描打一級圖譜,再將一級全掃描範圍分為若干視窗,最後迴圈對每個視窗所有離子進行選擇、碎裂和檢測嗎?
是的,您對資料獨立採集(Data Independent Acquisition, DIA)的基本原理理解得很準確。DIA通常透過以下步驟實現高低碰撞能量的交替採集: 1.全掃描一級質譜圖: 首先進行一級質譜的全掃描,以獲得樣品中所有物質的m/z(質荷比)資訊。這一步不涉及碎片化,而是用於
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使用氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)分析糖苷鍵結構時,結果的解析主要依賴於質譜圖譜的分析。下面是進行結果解析時的一些關鍵步驟: 1.GC圖譜峰的分析: 首先,需要識別GC圖譜上的峰,這些峰代表不同的化合物。每個峰對應一個質譜圖,顯示了該化合物的質量分佈。 2.質譜圖的詳細分析 分子離子
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1.條帶的清晰度和完整性: 首先觀察每個條帶的清晰度和是否完整。如果條帶模糊或有拖尾現象,可能表示樣品中含有雜質。 2.條帶的數量: 一個泳道出現多個條帶可能表示樣品中含有多種蛋白質。如果目標是單一蛋白質,應該只出現一個清晰的條帶。 3.背景的乾淨程度: 背景的乾淨程度也是判斷純度的一個
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蛋白質的液相色譜-質譜聯用(LC-MS)分析時,引數設定取決於樣品特性和分析目的。常見的引數設定如下,可以供您參考: 1.色譜條件: 柱子型別:C18反相色譜柱。柱長一般在15-25 cm,內徑2.1 mm,粒徑3-5 µm。 流動相:A相:水+0.1%甲酸或三氟乙酸。B相:
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