GC-MS前對樣品進行甲基化和糖醛酸還原的操作方法

在使用氣相色譜-質譜聯用（GC-MS）進行糖苷鍵檢測之前，對樣品進行甲基化和糖醛酸還原是重要的步驟。甲基化是用來保護糖苷鍵不在隨後的分析中被破壞。它透過替換糖分子中的羥基（-OH）為甲基（-CH3），增加了分子的穩定性。糖醛酸（如葡萄糖醛酸）在GC-MS分析中可能不穩定，因此需要將其還原為對應的醇（如葡萄糖）。實驗的詳細步驟如下：




一、甲基化




1.取樣：

取適量的樣品放入反應管中。




2.加入甲基化試劑：

通常使用硼氫化鈉（NaBH4）和甲酸或三氟乙酸（TFA）作為甲基化試劑。將試劑加入樣品中。




3.加熱反應：

將混合物在密閉條件下加熱，一般在60-80°C下反應1-2小時。




4.終止反應：

反應完成後，加入適量的水或其他終止劑來終止反應。




5.提取：

使用有機溶劑（如己烷或乙酸乙酯）提取甲基化產物。




6.乾燥和濃縮：

去除溶劑，得到乾燥的甲基化產物。




二、糖醛酸還原




1.取樣：

取適量的糖醛酸含有的樣品。




2.加入還原劑：

通常使用硼氫化鈉（NaBH4）作為還原劑，加入到樣品中。




3.室溫反應：

在室溫下讓樣品與還原劑反應，通常反應時間為幾小時至一夜。




4.酸化：

加入弱酸（如冰醋酸）調整pH值，使反應停止。




5.提取和純化：

使用適當的有機溶劑提取產物，並透過色譜等方法進行純化。




完成以上步驟後，樣品即可用於GC-MS分析。需要注意的是，這些步驟可能需要根據具體的樣品型別和分析目的進行適當調整。同時，操作過程中應注意安全，遵守實驗室的安全規程。




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