蛋白分析FAQ彙總

任何考馬斯亮藍染色條帶都可以透過我們的高靈敏度質譜機器在 MS 和 MS/MS 水平上進行鑑定。如果蛋白質樣品的濃度約 100 fmole/μl，則每條泳道上樣 10μl 應該會產生每條泳道大約 1pmol 的蛋白質。>1 pmol 的蛋白質條帶可以透過幾種型別的染色劑（考馬斯膠體、Zn、C

我們利用色譜梯度根據肽混合物的疏水性分離它們。這降低了肽混合物的複雜性，並在機器執行期間執行數千次 MS 和 MS/MS 掃描。在 MS/MS 測序之前，機器有足夠的時間在離子阱中富集肽。透過這種方式，不僅蛋白質的覆蓋率會增加，而且能比 MALDI-TOF/TOF 產生更好的質量資料。在 M

這實際上取決於實驗型別。通常，我們使用 10-15 cm 長色譜柱時一次上樣 0.5-1 µg 肽混合物，使用 50 cm 長色譜柱時上樣 1-2 µg 肽混合物。如果蛋白質有足夠的量，我們建議用胰蛋白酶消化至少 50 µg 蛋白質。請與我們討論您的樣品製備方案，以避免可能干擾蛋白質消化和質

如果您的樣品複雜程度較低，我們建議您在 SDS-PAGE 凝膠上執行它們，以去除汙染物和質譜干擾物質。只需短時間執行，讓蛋白質混合物進入濃縮膠並濃縮為一個粗條帶。但並非所有蛋白質都能在 SDS-PAGE 凝膠中得到很好的分離，尤其是膜蛋白。如果您使用與蛋白質組學相容的裂解緩衝液製備複雜的細胞

幾乎完全重同位素摻入所需的細胞倍增次數通常為 5-6。許多細胞系（例如，HeLa、HEK293）已經證明了這一點。相關服務:基於SILAC/Dimethyl標記的定量蛋白組分析

應該採取一些程式性措施來幫助減少這種不利的代謝反應。有關執行 SILAC-MS 實驗的最佳實踐的設計說明和提示/技巧，請參考 Mann 等人的Nature Protocols文章 ( PMID: 17406521 )。相關服務:基於SILAC/Dimethyl標記的定量蛋白組分析

三重 SILAC-MS 實驗通常使用以下三種同位素標記狀態的 L-Lys 和 L-Arg：1）light(L)，未標記的 L-Arg (ULM-8347) 和未標記的 L-Lys (ULM-8766)；2）medium (M)， 13C6 L-Arg (CLM-2265) 和 D4 L-

自下而上的蛋白質組學是一種常見的基於質譜的工作流程，用於鑑定和定量給定樣品中的蛋白質，透過分析蛋白質酶切產生的獨特肽段進行。相關服務:定量蛋白組分析

我們主要是一家蛋白質組學機構，因此您能想到的任何蛋白質質譜實驗，我們都可以為您提供幫助：凝膠斑點，磷酸化，泛素化，比較樣品中的所有蛋白質，SILAC，iTRAQ, TMT，二甲基化，TAILS，定量，蛋白質複合物的免疫沉澱，二硫化物排列，翻譯後修飾。我們還為化學家執行了一個儀器，這樣他們

是的。我們有一個專門的質譜儀來分析完整蛋白質。在 50,000 Da 蛋白質上它精確到約 0.5 道爾頓。該儀器能夠發現重組蛋白中的單個二硫鍵。因此，您不僅可以檢查是否表達了正確的蛋白質，還可以獲得在 SDS-PAGE 凝膠上永遠看不到的結構資訊。此外，它比執行凝膠更快。分析一個完整的蛋白質

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