蛋白分析FAQ彙總
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建議使用硝化纖維素膜。雖然可以使用PVDF和其他類似的膜,但它們有時會導致背景增加。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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建議使用1X TBS、5%牛奶或0.05%吐溫-20。封閉反應在室溫下進行30-60min或在4℃下過夜。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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可以根據一抗的說明書進行稀釋,如果沒有相關資訊,可以對相關的陽性和陰性對照進行連續滴定。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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蛋白質印跡是一種按大小分離蛋白質的技術。一般來說,蛋白質越小,它透過SDS凝膠遷移的速度就越快。但是,遷移速度也受其他因素的影響,因此觀察到的實際波段大小可能與預測的大小不同。比如:1、翻譯後修飾-磷酸化和糖基化等,這就增加了蛋白質的大小;2、翻譯-大多數蛋白質被合成為促蛋白,然後切割以產生
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可能的原因有抗體濃度不夠、抗體失效、凍幹抗體溶解度不夠或者被檢測的組織/細胞沒有不含有目標蛋白等。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• 如果感興趣蛋白分子量大於180kD,是否需要改變轉印條件?
轉印條件及緩衝液在不同的實驗中存在差異,需根據具體實驗內容對其進行最佳化調整,當蛋白分子量超過180kDa時,使用20%的MeOH,並新增 0.05%的SDS,在轉印時間上嘗試1A轉印1小時。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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當然,而且2D效果更好,因為聚集在1D帶中的蛋白質透過等電聚焦在2DE中進一步擴散。2D WB非常敏感且資訊豐富。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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一般來說,對於複雜樣品,如SF凝膠上的細胞裂解物,考馬斯藍或Sypro ruby染色的最大負荷為200μg,銀染的最大負載為50μg。考馬斯藍和銀染的複雜樣品(如細胞裂解物)的蛋白質濃度應分別為5mg/ml和1mg/ml,因為可裝載的最大體積為50μl。對於LF凝膠,考馬斯藍和Sypro r
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蛋白質鑑定通常採用質譜法(LC-MS/MS)。考馬斯藍染色凝膠上的任何多肽斑點,無論多麼微弱,都可以透過質譜鑑定。銀染凝膠上的蛋白質也可以識別。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• 想對蛋白質進行脫糖基化並透過LC-MS對其進行分析,如何化學地對細胞的蛋白質組進行去糖基化?
N-鏈糖基化可透過用N糖苷酶F處理來去除。相關服務:糖組學分析服務
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