使用Sephadex G-100純化蛋白時,如果遇到柱子堵塞和流速極其慢的問題,可以嘗試以下幾種方法來解決:
1.檢查柱子的裝填:
確保Sephadex G-100介質在裝填時均勻且沒有空氣泡。如果存在空氣泡或裝填不均,柱子的流動性會受到影響。
2.調整樣品的體積和濃度:
如果樣品的體積過大或者濃度過高,會導致柱子堵塞。嘗試減少樣品的載入量或者稀釋樣品。
3.提高緩衝液的強度:
有時候增加緩衝液的強度可以幫助改善流動性。例如,提高緩衝液中的鹽濃度。
4.溫和清洗柱子:
如果柱子已經被堵塞,可以嘗試用較高鹽濃度的緩衝液或含有洗脫劑的緩衝液進行溫和清洗。
5.重新裝填柱子:
如果以上方法都不能解決問題,可能需要重新裝填柱子。這包括清洗和再平衡Sephadex G-100介質。
6.檢查系統的其他部分:
確保所有連線和管路沒有堵塞或洩漏,這些也可能導致流速減慢。
如果問題持續存在,可以考慮諮詢製造商或尋求專業的技術支援。
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