為什麼用Alix蛋白抗體,實驗WB上樣細胞裂解液會顯示兩個條帶?哪個爲準?
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查閱文獻和資料庫:瞭解Alix蛋白的已知分子量以及可能的同源異構體或已知的修飾。
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使用標記物對照:在WB實驗中,使用分子量標記物對照,以估算目標蛋白質的分子量。
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進行蛋白質降解或磷酸化分析:如果懷疑降解或磷酸化是原因,可以透過改變樣品處理方法(如使用蛋白酶抑制劑)或使用特定的磷酸化狀態抗體進行驗證。
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使用其他抗體進行驗證:使用另一種針對Alix蛋白的抗體進行實驗,以確定這兩個條帶是否仍然出現。
使用Alix蛋白抗體在Western Blot(WB)實驗中出現兩個條帶可能有以下原因:
1、蛋白質同源異構體:
Alix蛋白可能存在不同的同源異構體,這些異構體在分子量上略有不同,從而在凝膠上表現為不同的條帶。
2、蛋白質降解產物:
如果Alix蛋白在細胞裂解過程中部分降解,這可能導致生成較小的降解片段,這些片段也會被同一抗體識別並在WB上顯示為較低分子量的條帶。
3、磷酸化或其他蛋白質修飾:
蛋白質可能因磷酸化或其他型別的修飾而導致分子量的微小變化。這種修飾可能改變蛋白質在SDS-PAGE上的遷移速度,從而產生不同的條帶。
爲了確定目的條帶,你可以從以下幾個方面著手:
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