請問為什麼western blot 蛋白質卡在上面跑不下來?
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電壓過低:如果使用的電壓太低,蛋白質的遷移速度會很慢,可能看起來像是蛋白質卡住了。
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電泳時間不足:如果電泳時間太短,蛋白質可能還沒有足夠的時間透過凝膠。
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凝膠孔徑不合適:如果使用的凝膠孔徑太小,大分子量的蛋白質可能無法透過。
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凝膠濃度過高:高濃度的凝膠更適合分離小分子蛋白,可能導致大分子蛋白難以遷移。
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樣品濃度過高:過高的蛋白質濃度可能導致蛋白質在凝膠孔中聚集。
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樣品未充分變性或還原:如果樣品沒有充分變性或還原,蛋白質可能以凝聚或二級結構的形式存在,這會影響其在凝膠中的遷移。
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緩衝液成分不合適:緩衝液的pH或離子強度不合適也可能影響蛋白質的遷移。
當進行Western blot 時蛋白質卡在上面跑不下來,可能有以下幾個原因:
1. 電泳條件不合適:
2. 凝膠問題:
3. 樣品問題:
4. 緩衝液問題:
解決方法:
1.調整電泳條件:增加電壓或延長電泳時間。
2.選擇合適的凝膠:使用較低濃度或大孔徑的凝膠以便於大分子蛋白的遷移。
3.最佳化樣品處理:確保樣品充分變性和還原,並避免過高的樣品濃度。
4.調整緩衝液:使用合適成分的緩衝液。
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