檢驗蛋白質的辦法有很多,什麼時候用Westen blot,什麼時候用ELISE呢?是有什麼規則嘛?
- 適用情況:Western blot通常用於檢測目標蛋白質的存在、相對錶達水平以及特定修飾狀態,如磷酸化、甲基化等。它可以提供關於目標蛋白質的分子量和免疫反應特異性的資訊。
- 操作步驟:Western blot的基本步驟包括蛋白質提取、蛋白質分離(通常透過SDS-PAGE)、轉膜(將蛋白質從凝膠轉移到膜上)、膜上抗體反應(使用特異性抗體與目標蛋白質結合)、視覺化和分析。
- 適用情況:ELISA主要用於定量檢測目標蛋白質的存在和表達水平。它可以在生物樣本中測定目標蛋白質的濃度,並且具有高靈敏度和高特異性。
- 操作步驟:ELISA的基本步驟包括塗覆(將特異性抗體固定在微孔板上)、樣品加入(加入待測樣品)、洗滌(去除未結合的物質)、檢測抗體新增(加入特異性檢測抗體)、洗滌、底物新增(加入底物以產生訊號)和測量(測定訊號強度)。
Western Blot和ELISA是兩種常用的蛋白質檢測方法,它們各自有自己的優點和適用場景。
1、Western blot(蛋白質印跡):
2、ELISA(酶聯免疫吸附測定):
在選擇使用Western blot還是ELISA時,可以考慮以下幾個因素:
1.目的:
如果你想檢測目標蛋白質的存在與否、相對錶達水平或者特定修飾狀態,可以選擇Western blot。如果你需要定量測定目標蛋白質的濃度,可以選擇ELISA。
2.抗體可用性:
檢測方法的選擇也取決於可用的特異性抗體。某些抗體可能適用於Western blot,而另一些抗體可能適用於ELISA。
3.樣本型別:
不同的樣本型別可能對不同的檢測方法有不同的適用性。例如,某些樣本可能需要經過蛋白質提取和分離步驟,這在Western blot中是常見的,而在ELISA中則不需要。
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