蛋白分析FAQ彙總

• • 蛋白純化——上樣前用於樣品過濾的推薦過濾器孔徑是多少？

  對於色譜前的樣品製備，應根據色譜介質的珠粒大小選擇過濾器孔徑。90µm或更大的色譜介質粒度—1µm過濾器孔徑；30或34µm色譜介質粒度—0.45µm過濾器孔徑；3 µm、10 µm、15 µm的色譜介質粒度或需要超淨樣品或無菌過濾時—0.22µm過濾器孔徑；相關服務:蛋白質純度和均一性表徵

• • 蛋白純化——我感興趣的蛋白質在純化過程中“消失”了，我該怎麼辦？

  這種情況可能是由於：1、蛋白質已被蛋白酶降解——向樣品和緩衝液中新增蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解消化；或透過 Benzamidine Sepharose 4 Fast Flow 等介質執行樣品以去除胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶。2、樣品製備過程中蛋白質吸附至過濾器——使用不同膜型別的過濾器。 再生纖

• • 抗體純化——我不知道蛋白A或蛋白G是否最適合我的抗體純化。我應該怎麼辦？

  蛋白G是實驗室規模的通用抗體捕獲的首選，與蛋白A相比，蛋白G與更廣泛的真核物種的IgG結合。蛋白G還與更多的IgG亞類結合。相關服務:蛋白質純度和均一性表徵

• • 抗體純化——洗脫後如何保持抗體活性？

  由於抗體純化中的洗脫步驟通常需要降低 pH 值，因此存在敏感抗體失去活性的風險。為防止這種情況可以用每毫升洗脫液 60 -200 µl 1 M Tris-HCl 緩衝液(pH 9.0 )d的標準準備收集管，這可以保持抗體活性，因為洗脫液的最終 pH 值將接近中性；或者在最佳化洗脫條件時確定保

• • 抗體純化——如何純化抗體片段？

  蛋白 L 透過與免疫球蛋白輕鏈的相互作用結合免疫球蛋白。 它首先是從大消化鏈球菌的表面分離出來的，並命名為蛋白質 L 的輕鏈。重鏈的任何部分都不參與相互作用，這意味著蛋白L比蛋白A或蛋白G結合更廣泛的抗體種類。Capto L 親和色譜法培養基(樹脂)可特異性地與抗體 kappa 輕鏈的可變區

• • 標籤蛋白純化——我需要天然的蛋白質，我能把標籤撕下來嗎？

  答案是肯定的，但刪除標籤並不總是那麼簡單。標籤去除總是包括使用序列特異性蛋白酶。凝血因子凝血酶和因子Xa是最常用的，但你需要確保它們各自的切割序列（LVPR↓GS和IEGR↓) 不存在於目標蛋白質中。一些標籤，例如谷胱甘肽-S-轉移酶 (GST)-標籤可以用更具體的蛋白酶去除，例如 PreS

• • 未標記蛋白質純化——我打算對我的目標蛋白進行功能研究，但我不能引入標籤來簡化純化。我該怎麼辦？

  如果存在與蛋白質特異性結合的配體，則可以透過單個親和步驟純化未標記的蛋白質。 如果無法使用親和步驟，您可能需要使用多步驟純化策略。多步驟純化包括根據目標蛋白的性質選擇合適的純化技術組合。相關服務:蛋白質純度和均一性表徵

• • 未標記蛋白質純化——未標記的好處是什麼？ 標記是否純化更困難？

  如果您對功能研究感興趣，標籤可能會帶來不確定性，或者更糟的是，會改變或完全破壞目標蛋白的功能。此外，標籤本身會干擾您以您想要的方式使用蛋白質的能力。當蛋白質被用作治療劑並且您希望儘可能接近天然形式時，這一點尤為重要。相關服務:蛋白質純度和均一性表徵

• • SEC——為什麼我的SEC色譜柱解析度低？

  在尺寸排阻色譜（SEC）中，許多因素會影響解析度，如介質的粒度、柱長和樣品體積。但另一個可能不太明顯的方面是液相色譜 (LC) 系統本身。重要的是儘量減少系統中的死體積，例如透過使用短而窄的管道並移除系統流路中所有不必要的元件。相關服務:蛋白質純度分析（分子篩/反相色譜）

• • SDS-PAGE使用的材料有什麼？

  電源：用於將交流電流轉換為直流電流。 凝膠：這些凝膠要麼在實驗室中自行製備，要麼從市場上購買。 電泳室：應使用適合的SDS-PAGE凝膠電泳室。 蛋白質樣品：蛋白質用SDS-PAGE樣品緩衝液溶解並煮沸10分鐘。新增還原劑，例如二硫菌醇或2-巰基乙醇，以最大限度地減少二硫鍵，防止任何叔蛋白摺