蛋白分析FAQ彙總
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檢測翻譯後修飾的方法有 1.用於檢測翻譯後修飾的蛋白質印跡（Western Blotting）。 2.用翻譯後修飾親和珠進行免疫沉澱。 3.使用質譜檢測翻譯後修飾。 4.用於檢測翻譯後修飾的體外檢測。相關服務:翻譯後修飾蛋白組分析
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• 離子交換色譜—為什麼要選擇離子交換色譜（Ion Exchange Chromatography，IEX）？
離子交換色譜（IEX）根據分子表面淨電荷的差異來分離分子。IEX可用於純化蛋白質、肽、核酸和其他帶電生物分子，提供高解析度和高負載能力的基團分離。IEX可以分離電荷性質只有微小差異的分子種，如兩種只有一個帶不同電荷氨基酸的蛋白質。相關服務:蛋白質純度和均一性表徵
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先選擇強離子交換劑。如果選擇性不夠好，嘗試使用弱離子交換劑。強離子交換劑（Q、SP和S）在較寬的pH值範圍內較穩定，而弱離子交換劑的穩定性（DEAE、ANX和CM）隨pH變化。陽離子交換劑和陰離子交換劑都可用於蛋白質純化，對於某種特定蛋白質來說選擇其中一種可能更有效。如果蛋白等電點pI>7，
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緩衝離子應具有與IEX介質上的官能團相同的電荷。對於陰離子交換，選擇高於等電點（pI）0.5-1個pH單位的緩衝液，因為隨著pI的增加，蛋白質會結合得更緊密。對於陽離子交換，選擇低於pI0.5-1個pH單位的緩衝液，因為隨著pI的降低，蛋白質會結合得更緊密。 若同時進行陰離子和陽離子交換，則
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a）樣品中的干擾。解決方案：使用標準品檢查色譜柱效能。b）主峰之前的肩峰或基線逐漸升高可能是另一個樣品成分。解決方案：提高效率或改變系統的選擇性以提高解析度。如有必要，嘗試其他柱型別。c）柱過載。解決方案：注入較小體積或稀釋液（例如1：10 或1：100）的樣品。d）樣品溶劑與流動相不相容。
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• hplc—為什麼一個或多個色譜峰的高度在不同的色譜分析之間會發生變化？
a)一個或多個樣品組分劣化或柱活性改變。解決方案：使用新鮮樣品或標準品來確認樣品是問題的根源。如果部分或全部峰值仍小於預期值，則更換色譜柱。b）樣品製備過程的變化。矩陣中的差異會影響峰值高度。解決方案：檢查樣品製備過程，消除基質效應。c）洩漏，尤其是在注射器埠和柱入口之間。解決方案：檢查系統
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HILIC是指親水相互作用液相色譜法，是一種用於分離極性物質的技術，也稱為水性正相色譜法。固定相必須具有極性，例如二氧化矽、二醇、胺、醯胺或兩性離子。流動相通常使用乙腈/水混合物，其中水是強組分，因此表現出比乙腈更高的洗脫強度。因此，HILIC是正相色譜的一個子類別，顯示出與反相相反的洗脫模
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氨基酸分析（AAA）是透過用恆沸鹽酸（6N HCl）對肽進行液相水解，然後對遊離氨基酸進行柱前衍生化。衍生化的氨基酸透過反向高效液相色譜分離。單個峰的整合允許測定肽水解物的氨基酸組成。然而，Trp的吲哚部分在水解過程中被破壞；Asn和Gln的側鏈醯胺基團以及Pyr的內醯胺迴圈將分別水解產生A
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氨基酸分析是一種基於離子交換液相色譜的技術，有廣泛的應用領域，以提供定性和定量的成分分析。 操作的基本原理是由Spackman，Moore和Stein於1958年開發的連續流動色譜程式。目前，這一基本原理已經過改進，可以進行全自動、高速、靈敏的分析。有時，這被稱為經典氨基酸分析。 將含有氨基
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氨基酸分析是準確定量蛋白質的黃金標準。氨基酸分析服務非常簡單：首先用強酸對一定量的樣品進行水解，然後檢測和定量單個氨基酸。相關服務:氨基酸組成分析
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