蛋白分析FAQ彙總
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• 疏水相互作用色譜HIC——進行HIC分析時pH值是否重要?
建議在蛋白質最穩定性的pH範圍內操作。pH可以影響目標分子從色譜柱中結合和洗脫的效率,但這是特定情況,對於不同的分子,從一個pH值到另一個pH值可能不會顯示相同的趨勢。 相關服務:蛋白質純度分析(分子篩/反相色譜)
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• 離子交換色譜——強離子交換樹脂和弱離子交換樹脂有什麼區別?
術語“強”和“弱”是指官能團的酸/鹼性質。 如果配體來源於強酸或強鹼,則稱為強離子交換樹脂。 如果配體來源於弱酸或弱鹼,則稱為弱離子交換樹脂。 相關服務:蛋白質純度分析(分子篩/反相色譜)
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• 使用離子交換色譜時,如何最大限度地提高目標分子和雜質之間的分離度?
在離子交換色譜中有許多方法可以實現更好的分離,這些方法也可以應用於其他色譜模式。首先,可以透過增加柱床高度來最大化解析度。典型的柱床高度範圍為15cm-30cm。如果降低線速度,則30cm以上的柱床高度都將導致背壓升高而通量降低。柱床高度升高的好處是可以在相同流速下增加樣品在色譜柱中的停留時
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離子交換色譜通常用於從發酵原料中捕獲和濃縮目標蛋白質(因為所有蛋白質都具有與其一級結構相關的一些電荷)。相關服務:蛋白質純度分析(分子篩/反相色譜)
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選擇目標蛋白尺寸/體積在樹脂分離範圍中間大小的樹脂。這樣可以很好的將較大和較小的分子量的化合物從目標蛋白中分離。 相關服務:蛋白質純度分析(分子篩/反相色譜)
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當樣品溶劑比流動相強時分析物往往會在色譜柱中洗脫得太快,通常會導致峰變形、增寬、靈敏度差和保留時間縮短。相關服務:蛋白質純度分析(分子篩/反相色譜)
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• HPLC——如果將樣品注入較弱的進樣溶劑中可以獲得更銳利的色譜峰嗎?
這種情況下,樣品最初集中在色譜柱的頭部並緊密地穿過色譜柱。這種情況有時用於最大限度地減少較大體積樣品進樣的條帶展寬。但需注意的是,樣品組分也必須可溶於流動相才能使其起作用。相關服務:蛋白質純度分析(分子篩/反相色譜)
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死體積是HPLC系統從進樣點到檢測點之間的體積,不包括色譜柱。死體積可以透過用零死體積聯結器替換色譜柱來測量。透過注入非常少量的樣品,可以測量注入時刻和最大峰高之間的時間。該時間乘以流速可以很好地估計系統死體積。 停
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由於可電離化合物的保留時間對流動相pH值非常敏感,因此有必要透過新增緩衝液來控制流動相的pH值。當加入少量酸或鹼時,緩衝液可維持穩定的pH值。許多物質已被用做HPLC中的緩衝液。用於紫外線檢測的HPLC最常用的緩衝液是磷酸鹽和乙酸鹽。磷酸鹽和乙酸鹽是特別有用的緩衝液,因為它們可以在低於220
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• HPLC——為什麼我的色譜圖顯示拖尾峰,鬼峰,前峰,分裂峰/肩峰或圓形峰?
由於多種原因可能會出現拖尾峰:質量過載—當注入較少的樣品量(質量)時,峰會變得更加對稱或分解為兩個單獨的峰。因此可以使用更稀釋的進樣樣品來糾正這種情況。二次相互作用—當注入中性化合物(苯乙酮或甲苯)時,峰變得對稱。可調節流動相pH值以中和帶電的分析物。對於較大內徑的色譜柱 (>10 mm),
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