蛋白分析FAQ彙總
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所用樣品中不表達或低水平表達目標蛋白、沒有足夠的抗體捕獲目標蛋白、目標蛋白沒有從珠子上洗脫、抗體沒有結合免疫吸附磁珠、使用的裂解液不正確等。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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一般情況下可以選擇不同種屬來源的一抗分別進行IP和WB實驗,然後再選擇無種屬交叉反應的二抗進行WB實驗。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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可能是由於顯影液或底物失效、二抗孵育過多造成的。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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顯影過強-上樣量大;顯影太弱-上樣量小。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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可能是一抗的濃度過高或孵育的時間太久。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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目的蛋白濃度不高時可能出現這種情況,因為IP能濃縮富集而WB不能。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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這種情況可以考慮蛋白序列出現移碼等錯誤、GST 融合蛋白被機械裂解的方法變性(比如超聲)、GST 融合蛋白髮生聚集沉澱、GST融合蛋白被過度稀釋、結合緩衝條件不適宜等。相關服務:GST pull-down蛋白相互作用分析
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檢查洗脫液的體積、緩衝液中谷胱甘肽濃度及離子強度是否過低。相關服務:GST pull-down蛋白相互作用分析
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可能時細胞破碎時超聲處理過度、分子伴侶被共純化以及GST融合蛋白被蛋白酶部分降解等原因造成的。相關服務:GST pull-down蛋白相互作用分析
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1、純度:>95(基於摩爾數);2、含量:50-100 pmol(液體體積控制在20ul);3、修飾封閉:N 端未被封閉;4、樣品形式:液體、乾粉或PVDF膜;5、無干擾物如蛋白酶、氨基酸、胺、鹽分、乙醛和去汙劑等。相關服務:基於Edman降解的蛋白N端序列分析
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