蛋白分析FAQ彙總
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input表示陽性對照。免疫共沉澱實驗中,會直接取細胞裂解液進行WB,用於驗證細胞裂解液中確實存在目的蛋白,即陽性對照。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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建議最好選擇兩個不同源的抗體。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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適當降低抗體濃度;選擇特異性較好的抗體若抗體特異性不好,則換抗體相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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• CO-IP實驗中使用的ProteinA/G瓊脂糖珠有什麼作用?
ProteinA/G磁珠能特異性的結合抗體FC片段,抗體可以結合與目標蛋白相互作用的蛋白。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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常用的單克隆抗體是正常小鼠的IgG;常用的多克隆抗體為正常兔IgG。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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排除抗體非特異性結合的可能。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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1、用兔的多克隆抗體IgG做對照;2、用Fab和Fc抗體特異性封閉輕鏈和重鏈。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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• CO-IP中檢測到的與目標蛋白相互作用的蛋白訊號太弱是什麼原因?
1、目的蛋白與蛋白之間的相互作用太弱或不太穩定;2、裂解液中的去垢劑濃度太高或配方過於劇烈;3、樣品目的蛋白或相互作用蛋白含量較低。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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IP利用抗體與抗原(常為靶蛋白)特異性結合將抗原從混合體系沉澱下來,初步分離靶蛋白;CO-IP利用抗體去識別兩個相互作用的蛋白質的其中一個,從而將兩個相互作用的蛋白一起沉澱下來。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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CO-IP利用抗原抗體相互作用的原理沉澱兩個相互作用的蛋白質;Gst pull-down則是利用帶GST標籤的重組蛋白,與目的蛋白進行孵育,最後用結合GST的Beads拉下相互作用複合物。相關服務:CO-IP免疫共沉澱法蛋白互作分析
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