蛋白分析FAQ彙總
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凝膠過濾色譜,也稱為尺寸排阻色譜,用於分離不同大小的分子。除了分離不同大小的不同蛋白質外,還可以解析特定蛋白質的低聚形式。相關服務:蛋白質純度分析(分子篩/反相色譜)
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常用的凝膠過濾基質由交聯聚丙烯醯胺、瓊脂糖、葡聚糖或它們的組合組成的多孔珠組成,並以懸浮形式或乾燥粉末形式提供。相關服務:蛋白質純度分析(分子篩/反相色譜)
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• 圓二色譜分析——如何用圓二色譜(CD)光譜檢視吸光度光譜?
確保在CD模式下勾選吸光度選項。收集或載入一個涵蓋波長範圍、頻寬和步長的背景測量值,以便在CD掃描期間計算吸光度訊號。相關服務:蛋白質圓二色譜分析
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• 圓二色譜分析——用於圓二色譜(CD)分析的樣品的最佳吸光度是多少?
約0.9 AU的吸光度可確保最佳的訊號:噪聲水平。通常,任何吸光度超過2 AU的CD資料都是不可靠的,因為樣品和緩衝液吸收大於99%的光。相關服務:蛋白質圓二色譜分析
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• 圓二色譜分析——緩衝液組分可能會干擾圓二色譜(CD)分析,該怎麼辦?
遠紫外區域(通常為260-180 nm)的CD分析可能受到在較低波長下某些緩衝液組分的高吸光度的影響。爲了減少高吸收緩衝液的影響,並在達到2AU限制之前使測量深入紫外線,請使用具有較短光程的流通池或比色皿。相關服務:蛋白質圓二色譜分析
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• 圓二色譜分析——減少噪聲是使用多次重複掃描更好,還是增加每點取樣時間更好?
CD光譜中的噪聲水平可以透過增加每點取樣時間設定或平均重複掃描來降低——每種方法都會產生相同的結果。重複掃描會產生一系列更快的掃描,可以快速識別和糾正不適當的設定,但確實需要數據處理來平均最終頻譜。增加每點時間設定可生成無需進一步數據處理的單一頻譜。相關服務:蛋白質圓二色譜分析
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CD光譜背景產生的訊號接近於零,但可能揭示由光學元件和探測器的雙折射特性引起的微小特徵。基線不應隨時間而變化,並在CD資料的正常處理過程中減去,即緩衝頻譜減去。相關服務:蛋白質圓二色譜分析
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當系統空閒時,自動快門可防止單色器暴露在遠紫外線下。快門在測量開始前開啟,在測量完成時關閉。相關服務:蛋白質圓二色譜分析
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比色皿支架(單池或Chirascan 6池)的底座與光學中心線(測量光束的中點)之間的距離為15mm。請注意,標配的單池支架包括一個可拆卸的墊片,可將比色皿升高6.5mm,並允許減少樣品體積。相關服務:蛋白質圓二色譜分析
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• DDA蛋白質組學、DIA蛋白質組學與靶向蛋白質組學在資料獲取方式上有何差異,他們的優點和侷限性分別是什麼?
DDA-資料依賴性採集:經典鳥槍蛋白質組學。質譜儀選擇MS1中最高強度的離子進行MS2電離。優點:無偏倚的蛋白質檢測。無需事先假設。缺點:由於不同的肽段在不同的執行中檢測到,所分析的蛋白質重複性低,批次效應大。同樣導致許多資料丟失。在確定檢測樣本中含量最高的蛋白質時誤差較大,尤其是對蛋白質濃
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