蛋白分析FAQ彙總

• • 在尺寸排除色譜（SEC）分析中獲取良好峰形的最佳鹽濃度是多少？

  最佳鹽濃度取決於有關化合物的性質。通常情況下150-250mM最好，但也必須平衡化合物的離子性和疏水性。鹽濃度越低，離子交換越明顯。在較高的鹽濃度下，由於蛋白質的鹽漬化，可以觀察到更多的疏水性吸附。相關服務:蛋白質純度分析（分子篩/反相色譜）

• • 尺寸排除色譜（SEC）的原理？

  流動相中的分子可能呈現3種構型: 線性構型，例如 PEG; 分支構型，例如葡聚糖; 球狀構型，例如蛋白質。因此，給定的分子在溶液中將有一個獨特的流體動力學半徑。正是由於分子尺寸的差異，才能夠透過尺寸排阻液相色譜分離混合物中的化合物。而大分子物質將不能或有限的進入SEC柱子的凝膠孔內，較小的分

• • 什麼是GPC？

  尺寸排阻色譜法(SEC)是一種根據分子大小或嚴格來說根據流體動力學半徑分離聚合物的方法。當用有機溶劑作為流動相時，就稱其為凝膠滲透色譜法 (GPC)。GPC是聚合物化學中用於測量分子量分佈的常用方法。所有GPC分析的共同點是由重複化學單元數量不同的線性分子分佈組成的聚合物樣品被輸送到充滿多孔

• • 在流動相中新增新增劑以透過SEC分析蛋白質有哪些優缺點？

  有時在SEC流動相中使用新增劑可以促進蛋白質的溶解，防止蛋白質與固定相發生二次相互作用或使蛋白質變性。用於SEC蛋白質分析的常用新增劑包括十二烷基硫酸鈉 (SDS)、尿素和鹽酸胍。這三種新增劑都增強了蛋白質的溶解性，並且它們都透過破壞蛋白質的非共價鍵來促進變性。在樣品和流動相中新增SDS等表

• • 選擇正確的SEC色譜柱時應考慮哪些因素？

  1、分子量和分子構型； 2、溶劑溶解度：需要什麼流動相以及色譜柱是否與該溶劑相容； 3、親水與疏水：這將決定流動相中使用的洗脫液的離子強度。一些蛋白質具有疏水位點，需要在流動

• • 如何選擇最合適的HIC樹脂？

  目標分子與HIC介質的結合機制是分子疏水性的函式，並且因每個分子而異。通常，目標分子的疏水性越強，固體支援物的疏水性越小。相反，分子的疏水性越低，固體支援物的疏水性越高。相關服務:蛋白質純度分析（分子篩/反相色譜）

• • 疏水相互作用色譜HIC——緩衝液中較高濃度的過渡金屬會與樹脂上的官能團形成複合物並束縛結合位點嗎？

  這個問題的答案是否定的。通常HIC官能團被設計成惰性的，使其主要與蛋白質形成疏水相互作用。然而，在某些情況下，可能會發生與緩衝液組分和樹脂固體支援物的非常輕微的相互作用。更重要的是過渡金屬是否與原料中的蛋白質相互作用取決於蛋白質本身而不是HIC樹脂。相關服務:蛋白質相互作用分析

• • SDS-PAGE中的濃縮膠和分離膠有什麼區別？

  濃縮膠和分離膠是兩種型別的聚丙烯醯胺凝膠，用於更好地分離每個樣品中的蛋白質。這兩種凝膠在pH值、聚丙烯醯胺含量、孔徑以及最終用途方面有所不同。 濃縮膠的pH值（6.8）低於分離膠（8.8）。 濃縮膠中的聚丙烯醯胺含量（通常約為4%）低於分離膠中的聚丙烯醯胺含量（約10%），這導致濃縮膠中的孔

• • 瓊脂糖凝膠和聚丙烯醯胺凝膠有什麼區別？

  這些凝膠間有3個主要區別，這導致它們在研究實驗室中的不同用途。 第一個區別是毒性；瓊脂糖被認為是完全無毒的，而聚丙烯醯胺粉末和凝膠被認為是中度危險的，在處理過程中需要防護。 這兩種物質之間的第二個區別是分子複雜性。瓊脂糖是複雜的，在構成凝膠基質的許多不同大小的分子之間有很大的間隙。聚丙烯醯胺

• • PAGE和SDS-PAGE之間有什麼區別？

  原始PAGE和SDS-PAGE之間的主要區別在於，原始PAGE中蛋白質遷移速率取決於蛋白質的質量和結構，而SDS-PAGE中蛋白質遷移速率僅由蛋白質的質量決定。 在原始PAGE中，蛋白質樣品在非變性和非還原性緩衝液中製備。因此，除了蛋白質的大小外，其二級、三級和四級結構都對遷移有影響。 在S