蛋白分析FAQ彙總

• • N端測序——可以分析液體形式的樣品嗎？

  可以，但是樣品在運輸前必須在微量離心管中冷凍乾燥。樣品應不含干擾緩衝液和鹽。儘管可以耐受低濃度的 SDS（高達 0.3%）和 PBS，但含有伯胺的緩衝液，如 TRIS 和 HEPES，應該被去除。注意：Edman測序無法分析含有一種以上蛋白質的複雜樣品。相關服務:基於Edman降解的蛋白N端

• • N端測序——需要多少蛋白質？

  對於純蛋白質，靈敏度限值約為 1 pmol，但我們建議 10 pmol 以確保獲得滿意的結果。相關服務:基於Edman降解的蛋白N端序列分析

• • N端測序——如果蛋白質在 N 端被阻斷了怎麼辦？

  不會獲得任何序列資訊。在這種情況下，唯一的選擇是使用基於質譜的方法嘗試內部測序。相關服務:基於Edman降解的蛋白N端序列分析

• • N端測序——可以檢測到半胱氨酸嗎？

  未經特殊修飾的半胱氨酸不能透過N端測序檢測到，結果會是空白。樣品必須被修飾以檢測半胱氨酸。注意：樣品應冷凍乾燥或在溶液中。請說明您是否需要 Cys 分析。相關服務:基於Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 氨基酸分析——樣品在 PVDF 膜上可以嗎？

  不可以，蛋白質必須凍幹。相關服務:氨基酸組成分析

• • 如何克服WB轉移不足或較差的問題？

  檢查蛋白質的大小：如果蛋白質>180 kDa，那麼需要透過以下方式最佳化轉印條件：1、使用20%的MeOH；2、新增 0.05% SDS轉印緩衝液；3、增加裂解物的載入量；4、在1A轉移1小時。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務

• • 如何避免“斑點”或不均勻的蛋白質印跡？

  為避免在進行蛋白質印跡分析時出現“斑點”或不均勻的印跡，建議：1、延長封條時間以最佳化封跡效果；2、延長洗滌週期（這對於組織勻漿樣品尤其重要）；3、在將奶粉新增到印跡中之前，請確保奶粉完全在溶液中；4、在去除一些抗體溶液之前，旋轉含有抗體溶液的試管，以防蛋白質聚集體。相關服務:蛋白質免疫印跡

• • 如何避免“斑塊狀”、不均勻的斑點出現在印跡上？

  為避免“斑塊狀”或印跡中出現不均勻的斑點，請嘗試： • 檢查用於細菌汙染的所有緩衝液。 • 確保在抗體和洗滌孵育期間膜完全浸沒。 • 在進行轉印之前，梳理掉膜和凝膠之間的所有氣泡。 • 透過將膜放在搖臂/搖床上，確保均勻接近整個印跡。 • 確保所有蛋白質印跡裝置均已正確清洗。 • 過濾HRP

• • 蛋白印跡每泳道可以分析多少蛋白質？

  全細胞裂解物建議50ug，核酸提取物建議25ug。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務

• • 不同濃度的SDS-PAGE凝膠適合分離的多少分子量的蛋白樣品？

  凝膠的濃度與其適合分離的蛋白分子量成反比，濃度越小的膠越適合分離大分子量的蛋白質樣品。通常8%膠適合分離100kDa以上的蛋白；10%適合分離50-100kDa左右的蛋白；12%的凝膠適合分離14-15kDa左右的蛋白；50%的凝膠適合分離13kDa以下的蛋白樣品。相關服務:基於SDS-PA