蛋白分析FAQ彙總
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• 對於進行自上而下蛋白質組學的人來說,在製備完整蛋白質分析物時,可靠的揮發性緩衝液是什麼?
蛋白質化學中使用的2種最常見的揮發性緩衝液是碳酸氫銨和乙酸銨。相關服務:基於Top down自上而下蛋白質組學
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可以從中分離出蛋白質的任何樣品都可以進行分析。這包括可以分析的所有生物和臨床樣品,例如血液,血清,血漿,組織,培養細胞,培養基,腫瘤活檢和鐳射顯微解剖樣品。所有動物、植物、線蟲、微生物、昆蟲和魚類樣品也可以進行分析。相關服務:二維凝膠電泳服務
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2D-DIGE過程非常敏感,使用不適當的緩衝系統可能會影響實驗的標記效率、再現性和準確性。基本上任何可以容納上游實驗得緩衝液都可以。相關服務:二維凝膠電泳服務
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一個2D-DIGE上最多可以執行多達三個樣本。兩個樣品用Cy3和Cy5標記,第三個樣品用Cy2標記。相關服務:二維凝膠電泳服務
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推薦用於2D-DIGE實驗的單個總蛋白質樣品的最小量為30μg。但是建議每個樣品至少提供100μg。相關服務:二維凝膠電泳服務
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在2D-DIGE(差異凝膠電泳)技術中,蛋白質樣品在透過2D電泳分離之前直接用熒光染料(通常為Cy2、Cy3和Cy5)標記。由於樣品可以用不同的熒光染料標記,因此可以在一種凝膠上多重存在,從而減少凝膠之間的差異。而在2D-PAGE中,每個凝膠只能分析一個樣品。此外,爲了視覺化2D-凝膠,凝膠
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檢測樣品中IgG的典型方法是僅使用IgG抗體的二級抗體。對於化學發光檢測,可以使用HRP耦合物或Cy染料標記熒光檢測。爲了量化其水平可以使用標記的sec.Ab(抗IgG或IgM)對目標蛋白(IgG或IgM)進行印跡,對合適的看家蛋白進行再印跡(如果使用熒光檢測,則進行多重檢測)。相關服務:蛋
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• 經Maxquant分析後的質譜資料是否可以使用ProteomeDiscoverer進行翻譯後修飾分析?
當質譜資料已經透過MaxQuant分析時,不可能再使用ProteomeDiscoverer進行搜尋,因為該程式使用機器原始檔案進行分析。MaxQuant有一個包含PTM的選項,並提供有關其位置的資訊。可以使用Perseus處理MaxQuant檔案,進行PTM分析。相關服務:蛋白質質譜鑑定
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疏水相互作用高效液相色譜(HILIC)以及柱層析等。相關服務:肽純度分析
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如果細胞在PBS中被快速冷凍,則分餾它們幾乎沒有損失,也不會對質譜鑑定造成影響。相關服務:蛋白質質譜鑑定
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