蛋白分析FAQ彙總

• • 我需要多少樣本才能獲得良好的鑑定？

  一個好的經驗法則是使用考馬斯亮藍或銀染有一個可見的條帶，或至少 10-100 fmol 的蛋白質。在某些情況下，我們常用的蛋白酶（胰蛋白酶）不適合您的蛋白質；對於小蛋白質來說，這更有可能。在這種情況下，將需要更多的蛋白質或可能需要不同的酶。相關服務:蛋白鑑定

• • 我的樣本做蛋白質印跡有一個不錯的單一條帶。這可以測序嗎？

  如果您使用典型的凝膠染色劑看不到它，則可能沒有足夠的蛋白質來鑑定，並確保您切割的正確的條帶。此外，WB 只能看到您感興趣的蛋白質，因此很可能也存在許多幹擾蛋白質，透過WB你根本看不到他們。此外，如果您在凝膠上執行全細胞裂解物，印跡它，然後執行蛋白質印跡，即使您使用非蛋白質封閉劑，我們也幾乎不

• • 我的樣品似乎都是角蛋白。我能做些什麼？

  角蛋白通常來自人為汙染，幾乎可以在樣品處理過程的任何時候引入。建築物內的灰塵通常主要是人體面板薄片，因此小心避免灰塵會有所幫助。保持樣品蓋好、仔細清潔所有接觸樣品的玻璃器皿和塑膠器皿、戴上無粉手套、不要徒手接觸樣品（或樣品溶液）、避免使用公用試劑以及使用專用裝置都有助於減少角蛋白汙染。相關服

• • 機構採取哪些步驟來控制角蛋白？

  我們非常密切地監測正在進行的樣品分析中的角蛋白水平，並在我們懷疑有問題時立即中斷樣品佇列。我們使用的試劑是大批次製備的、分裝的、冷凍的，並仔細測試了效能和汙染。我們的大部分操作都是在標準的 2 級罩中進行的，以減少汙染。我們通常仍然可以在我們自己準備和處理的樣品中檢測到低水平的角蛋白，但將角

• • 我的樣品含有 β-乳球蛋白和其他乳蛋白。我能做些什麼？

  您的實驗室可能進行了大量蛋白質印跡使用的脫脂牛奶，因此許多玻璃和塑膠器具可能被乳蛋白汙染。儘管這可能對您的 WB 有所幫助，但它使質譜分析變得困難，因為質譜儀將“看到”來自所有這些蛋白質的肽段。玻璃器皿在被蛋白質嚴重飽和後很難得到足夠的清潔，一個簡單的解決方案是獲取一些關鍵裝置並將它們僅用於

• • 我的樣本有太多來自免疫沉澱的抗體。我怎樣才能擺脫它們？

  有幾種可能的策略可以減少 IP 洗脫中的抗體量。一種是儘可能使用競爭性洗脫，例如使用抗原肽（例如FLAG、Myc）。另一種是使用共價結合的抗體。如果您使用的是帶有 His 標籤的構建體，最後一步可以是金屬柱而不是抗體。相關服務:蛋白分析

• • 如何最佳化我的 IP 以獲得更好的鑑定結果？

  您可以執行試用 IP 並透過 WB 對其進行監控。一個目標是儘可能多地拉下目標蛋白，這可以透過對上清液進行 WB 來評估。然後，儘可能多地從珠子上洗脫，再次由 WB 確定，最後一步可以使用熱 SDS-PAGE 上樣緩衝液從珠子上進行多次洗脫。最後按比例放大並嘗試銀或膠體考馬斯染色凝膠。希望您

• • 利用LCMS繪製蛋白組組學圖譜需要多少蛋白質？

  1D LC：20μg純蛋白質。 2D LC：100-200μg純蛋白質；但是，如果樣品需要額外的清潔，我們建議200-500μg。相關服務:蛋白質質譜鑑定

• • LCMS可以分析什麼型別的樣品？

  基本上任何蛋白質樣品，如細胞裂解物，整個組織，分泌的蛋白質，但不是放射性樣品。（注意：分泌的樣品必須使用血清/血漿遊離培養基。）相關服務:蛋白質質譜鑑定

• • 進行LCMS分析，樣品的最大體積是多少？

  樣品體積最多不超過250μL。相關服務:蛋白質質譜鑑定